Human GDF15 ELISA Kit

人生长分化因子15ELISA检测试剂盒;Human Growth Differentiation Factor 15  ELISA Kit

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被有Growth Differentiation Factor 15 （GDF15）捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体，HRP 酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB 在过氧化物酶（HRP）的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Growth Differentiation Factor 15 （GDF15）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（0D 值），计算样品浓度。

名称	9 6 T 配 置	备注
预包被96孔酶标板	8孔×12条	无
标准品	2 支	按说明书进行稀释
通用稀释液	2×20mL	无
浓缩生物素化检抗（100×）	120uL	按说明书进行稀释
浓缩酶结合物（100×）	120uL	按说明书进行稀释
20×洗涤液	2×10mL	按说明书进行稀释
底 物 （TMB）	10mL	无
终止液	6mL	无
封板膜	4张	无
说明书	1 份	无

血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清 和 其他生物液体

双抗体夹心法

31.25-2000pg/mL

实验所需自备试验器材：
1、酶标仪（450nm）
2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、5-50uL、20-200uL、200-1000uL
3、37℃℃恒温箱
4、蒸馏水或去离子水

样本处理及要求：
血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或 4℃过夜，然后 1000×g离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于 2-8℃1000×g离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃℃保存，但应避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的 PBS （0.01M,pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织碎。将碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1：9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于 5000×g离心 5~10 分钟，取上清检测。
细胞裂解液：贴壁细胞用预冷 PBS 轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用预冷PBS 清洗 3 次，每 1×10^6 个细胞中加入 150-200uL PBS 重悬（推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可适当减少 PBS 体积）并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于 2-8℃，1500×g 离心 10 分钟，取上清检测。
细胞培养上清：请 1000×g离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
其它生物液体：1000xg离心 20分钟，取上清即可检测。

检测前准备工作：
1、请提前 10分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2、标准品梯度工作液配制：加入1mL通用稀释液至冻干标准品中，静置15 分钟待其完全溶解后轻轻混匀（浓度为2000pg/mL） ，然后按照以下浓度：2000pg/mL、1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.25pg/mL、0pg/mL进行稀释。
倍比稀释方法 ：取7支EP管 ，每管中加入500uL通用稀释液,2000pg/mL的标准品工作液中吸取500uL到第一支EP管中混匀配成1000pg/mL 的标准品工作液 ，按此步骤往后依次吸取混匀。最后一管直接作为空白孔 ，不需要再从倒数第二管中吸取液体，具体如下图。
3、生物素化检抗工作液配制：使用前15 分钟将浓缩生物素化抗体于1000×g  离心 1 分钟，以通用稀释液将  100×浓缩生物素化抗体稀释成 1×工作浓度（例： 10uL  浓缩液+990uL  通用稀释液）  ，现配现用。
4、酶结合物工作液配制：使用前 15 分钟将100× 浓缩酶结合物于 1000×g  离心 1 分钟，以通用稀释液将 100×浓缩 HRP  酶结合物稀释成 1×工作浓度（例：10uL  浓缩液+990uL  通用稀释液）  ，现配现用。
5、1×洗涤液配制：取10mL 20×洗涤液到 190mL  蒸馏水中（从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可放置室温，待结晶完全溶解后再配制）。

操作步骤：
1、从室温平衡 10 分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2、加样：分别将样品或不同浓度标准品按照 100ul 每孔加入相应孔中，空白孔加入 100uL 通用稀释液。盖上封板膜后 37℃温育 60 分钟。（建议 ：将待测样本用通用稀释液最低稀释 1 倍后再加入酶标板内测试。从而减少基质效应对测试结果的影响，最后计算样本浓度时需乘以对应的稀释倍数。所有的待测样本和标准品在检测中建议设立复孔）。
3、加生物素化抗体：取出酶标板，弃去液体，不用洗涤。每孔直接加入生物素化抗体工作液 100uL ，盖上封板膜后 37℃温育 60 分钟。
4、洗板：弃去液体，每孔加入 300uL 1x 洗涤液，静置 1 分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 3 次（也可用洗板机洗板）。
5、加酶结合物工作液：每孔加入酶结合物工作液 100uL ，盖上封板膜后 37℃ 温育 30 分钟。
6、洗板：弃去液体按步骤 4 洗涤方法，洗板 5 次。
7、加底物：每孔加入底物（TMB）90uL ，盖上封板膜，37℃避光温育 15 分钟。
8、加终止液：取出酶标板，每孔直接加入终止液50uL ，立即在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算：
结果判断：
1、计算标准品和样本复孔的平均 OD值并减去空白孔的 OD 值作为校正值。以浓度为横坐标，OD 值为纵坐标 ，在双对数坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线。
2、若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

生长分化因子15（GDF15）首先被确认为巨噬细胞抑制性细胞因子-1或MIC-1。它是一种属于转化生长因子β超家族的蛋白质。正常情况下，GDF-15在大多数器官中以低浓度表达，由于肝脏、肾脏、心脏和肺等器官的损伤而上调。GDF-15的功能还不完全清楚，但它似乎在调节炎症途径方面有作用，并参与调节细胞凋亡、细胞修复和细胞生长，这是心血管和肿瘤疾病中观察到的生物过程。

Human

未开封试剂盒，4°C储存，有效期6个月。