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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 规格:
50ug
| 概述 | ||||||||||
| 描述 |
本试剂是—种高效、 通用的蛋白修饰工具。
转肽酶 sortaseA酶(SA酶)能够特异性识别蛋白C端含有的保守氨基酸序列LPXTG使LPXTG中 的苏氨酸/甘氨酸之间的肽键发生断裂,同时和蛋白质N端的多聚甘氨酸(GGG),之间形成酰基酶中间体,形成新的肽键,完成转肽反应,实现两个蛋白之间的共价结合。 外泌体表面部分蛋白的N端存在GGG结构,人工合成多肽或重组目的蛋白使得多肽/目的蛋白的 C端含有LPXTG序列。 因此,在SA酶的作用下,肽/目的蛋白将被共价修饰在外泌体表面。 ![]() 产品组分:
产品特点: 条件温和:生理条件下即可发生反应。 高效通用:弥补基因工程技术的缺陷,得到无法通过生物表达的功能蛋白。 | |||||||||
| 使用方法 |
1、0.3mg/ml(SA酶):500μM 多肽 /蛋白 混匀(可根据目的多肽 /蛋白量等比例调节酶用量)。
2、使用 pH Regulate buffer将 pH调节至 8.0,30 ℃孵育 30 min。 3、加入 5×1010particles的外泌体,混匀。 4、使用 pH Regulate buffer将 pH调节至 8.0,30 ℃震荡孵育 2 h。 | |||||||||
| 性能 | ||||||||||
| 储存/保存方法 |
各组分按照要求保存,有效期1年。
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| 注意事项 |
1、孵育温度为 30 ℃时效果最佳,请勿于室温或 37 ℃孵育。
2、pH Regulate buffer具有刺激性气味,请于通风橱内使用。 3、在反应体积较小的情况下请确保溶液被充分震荡。 |
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文献和实验远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态; 大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。 关键步骤 [1]: ● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。 ● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。 ● 分离 EVs:根据 280 nm
到细胞外;微囊泡(Microvesicles)直径为 100-1000 nm,以出芽的形式释放到细胞外;凋亡小体(Apoptotic body)直径为 50-2000 nm,由凋亡细胞产生。由于各种胞外囊泡的大小可能有交叉,所以要想通过分离手段得到某种纯化的特定囊泡是很难实现的。 图一 胞外囊泡的分泌 (图片来源于文献) 外泌体携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类和核酸,其中蛋白质包括跨膜蛋白、信号转导蛋白、细胞支架蛋白、酶等,现在很多文献会选择其中的几种膜蛋白和膜内蛋白作为外泌体的鉴定
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