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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
SHCC
- 运输方式:
干冰/常温
- 年限:
10年
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
1*10^6cell/T25
| 种属 | 人 |
| 别称 | MSTO-211 H; MSTO211H; MSTO-211; 211H; MeSoTheliOma-211H |
| 组织来源 | 肺,取材部位:胸腔积液 |
| 疾病 | 胸膜双相间皮瘤 |
| 传代比例/细胞消化 | 1:2传代,消化1-2分钟 |
| 完全培养基配置 | RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 |
| 简介 | MSTO-211H细胞是于1985年从一位肺二相间皮瘤患者的胸水中建株的,这个病人接受过多种药物联合前期化疗。MSTO-211H细胞具有高亲和力的EGF结合位点,并表达神经元特异性烯醇酶(NSE)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)的α与β亚基;未检测到左旋多巴胺脱羧酶(DDC)、邦巴辛与神经Tensin。MSTO-211H细胞过表达c-myc原癌基因,并没有观察到基因重排或扩增。MSTO-211H细胞V-src、v-abl、v-erbB、c-raf1、Ha-ras、Ki-ras和N-ras的表达呈阳性;未检测到N-myc、L-myc、c-myb、c-fos、v-fes、v-fms和v-sis癌基因的表达。MSTO-211H细胞的饱和浓度能达到4×10^5/cm^2,但达到这个浓度时就会从表面脱落。 |
| 形态 | 上皮细胞样 |
| 生长特征 | 贴壁生长 |
| 倍增时间 | ~30-40ho |
| 致瘤性 | Yes, tumors for med in approximately 20% of nude mice inoculated with MSTO-211H cells. |
| STR | Amelogenin: X,Y CSF1PO: 11,12 D13S317: 11,14 D16S539: 13 D5S818: 12 D7S820: 8,12 THO1: 8,9.3 TPOX: 11 vWA: 16,18 |
| 培养条件 | 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
| 冻存条件 | 冻存液:90%FBS,DMSO 10%, 或使用非程序冻存液:官网货号SH-H040 |
| 保藏机构 | ATCC; CRL-2081 |
| 产品使用 | 仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
1)复苏细胞:将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
- 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
a、收集细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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文献和实验据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增,电泳确认 PCR 产物大小,对大小正确的产物进行测序,如测序结果与理论序列一致,则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通:我们在实践中发现,即使 Donor 序列完全正确,部分鼠会存在突变或片段缺失的情况,我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致,所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的,建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
短串联重复序列(short tandem repeat,STR),又称为微卫星DNA ,重复单位为2-6bp,重复次数10~60多次,在DNA复制过程中的滑动、复制、修复过程中滑动链与互补链的碱基错配,从而导致一个或几个重复单位的缺失或插入,形成STR的多态性,主要应用于遗传连锁图谱分析、家系鉴定、身份认证等领域,同时也是鉴定细胞株被错误识别和交叉污染的主要工具。细胞株被错误识别及交叉污染的现象还是比较普遍的,虽然科研工作者使用各种各样的传统方法来鉴定细胞,但细胞交叉污染的问题却有增无减
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