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抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。
按作用对象
按作用对象,可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白,如1型变态反应中的lgE反应素抗体,能吸附在靶细胞膜上)
按动物抗体功能
根据注入细菌或病毒的不同,以及注射到不同种类的动物体内,得到不同免疫性能的抗病毒血清抗体。根据河南顺鑫动物血液制品有限公司的市场调研,市场上动物血清抗体大致分为以下几类抗体-
1、猪抗体-猪瘟抗体,猪蓝耳抗体,猪圆环病毒抗体,猪伪狂犬抗体,猪细小病毒抗体,猪口蹄疫抗体,猪流感抗体等。
2、禽抗体-小鹅瘟抗体,鸭肝抗体抗体,鸭浆膜炎抗体,禽流感抗体,新城疫抗体等
3、牛抗体:牛口蹄疫抗体,奶牛乳房炎抗体,牛流行热抗体,牛病毒性腹泻抗体,牛出血性败血症抗体等
4、羊抗体:羊痘抗体,羊口蹄疫抗体,羊小反刍兽疫抗体,羊快疫抗体,羊肠毒血症抗体,羊猝疽抗体,羊黑疫抗体等
5、犬抗体:犬狂-犬病抗体、犬瘟热抗体、犬副流感抗体、犬腺病毒抗体与犬细小病毒病抗体,狐貉水貂的伪狂犬抗体、细小病毒抗体、乙脑抗体等
按理化性质和生物学功能
按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。
IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体。它们在与抗原结合后启动补体的级联反应。它们还把入侵者相互连接起来,聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬;
IgG抗体激活补体,中和多种毒素。IgG持续的时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。他们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿得到保护;
IgA抗体进入身体的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。还可以通过母乳的初乳把这种抗体输送到新生儿的消化道黏膜中,是在母乳中含量多,为重要的一类抗体;
IgE抗体的尾部与嗜碱细胞、肥大细胞的细胞膜结合。当抗体与抗原结合后,嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体;
IgD抗体的作用还不太清楚。它们主要出现在成熟的B淋巴细胞表面上,可能与B细胞的分化有关。(IgD于1995年从人骨髓瘤蛋白中发现,分子量为175kD,主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生,中IgD浓度为3~40μg/ml,不到血清总Ig的1%,在个体发育中合成较晚。IgD铰链区很长,且对蛋白酶水解敏感,因此IgD半衰期很短,仅2.8天。血清中IgD确切的免疫功能尚不清楚。在B细胞分化到成熟B细胞阶段,除了表达SmIgD,抗原刺激后表现为免疫耐受。成熟B细胞活化后或者活化后或者变成记忆B细胞时,SmIgD逐渐消失。)
按可见反应
按与抗原结合后是否出现可见反应,可将其分为-在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体,即通常所说的抗体,以及不出现可见反应,但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。
按抗体来源
按抗体的来源,可将其分为天然抗体和免疫抗体。
抗体就是免疫球蛋白,是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生,抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用,使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞,浆细胞可产生分泌抗体。
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文献和实验固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次,每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min,1 × PBS 浸洗玻片 3次,每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤), 1 × PBS 浸洗玻片 3 次,每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS,在玻片上滴加 5% 的正常血清(与二抗种属来源一致或相似),室温封闭 1 h
-rat-Tex-Red(红)。 2、我的做法是两种一抗同时孵育,然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要自我摸索,我感觉一抗 4℃ 孵育过夜比较好,背景比较清晰。 3、我的阳性对照采用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是家兔和大鼠的 IgG,荧光标记物对照是 PBS+ 荧光标记物。 4、封闭血清是二抗来源动物的正常血清,我用的是 10% 正常 donkey 血清。 5、其余事项同免疫荧光单标操作。
非特异性连接 用 TUNEL 稀释缓冲液 1:2 至 1:10 稀释 TdT 浓度 细胞渗透前, 浸入 3% H2O2 甲醇稀 释液 10min,封闭内源性 POD 用正常抗绵羊血清封闭 用含 3% BSA 的 PBS 封闭 20min 减少转化溶液浓度 50% 取得器官后立即固定组织通过肝静脉灌注固定剂 用含有 ddUTP 和 dATP 的溶液封闭 使用甲醇固定,但同时应考虑甲醇 固定可能降低灵敏度 用 TUNEL 稀释缓冲液使标记混合 物浓度降低 50% 细胞渗透前, 浸入 3% H2O2 甲醇
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