JAM-C蛋白 | Human JAM-C, 32-241a

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

质，小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时，通过洗杂步骤，即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质，通过改变缓冲液的条件，如pH，或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢？仅达到所需的质量量级，如毫克级（或克级）即可满足吗？ 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要，比如，就蛋白的生物活性和纯度而言，通常会有所要求。   以下我们来讨论并且比较2种技术： His-tag系统和Strep-tag®系统，都使用了亲和层析法来纯化

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

，或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α（+）载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统，可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价，快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大，因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中，我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α（+）载体的构建，蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应（PCR

哺乳动物细胞表达的难点和解决方案，都帮你整理好了

型的蛋白，或进行高解析度的结构分析，愈来愈多的实验组选择哺乳类表达系统来生产融合蛋白。其原因为哺乳动物细胞生产出的重组蛋白与人类蛋白十分相似，有较完整的蛋白折叠、组合及翻译后修饰[3]。因此，愈来愈多科学家们更加关注于—如何从哺乳类细胞中高效的纯化目标蛋白。1 亲和标签的选择首先，需考虑选择合适的亲和标签。常用于哺乳动物表达系统的亲和标签有 His-tag、FLAG-tag、GST-tag及 Strep-tag® 等[4-12]，整理于下表：（点击放大查看）这些亲和标签在使用上各有千秋。使用