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- RayBiotech
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- 2025年07月15日
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产品名称】
通用名称：核酸提取或纯化试剂（磁珠法）
【包装规格】
50人份/盒
【预期用途】
主要用于甲基化分析中核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。
【检验原理】
在人体尿液中，外泌体核酸通常以小片段的形式存在，本产品应用二氧化硅磁珠技术，具有选择性结合特性，可高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤和DNase除去杂质和DNA，从尿液中高效纯化外泌体RNA，纯化的RNA产量高。
【主要组成成份】
|
序号 |
名称 |
主要成分 |
数量 |
规格 |
|
1 |
外泌体分离液 |
PEG |
1瓶 |
40mL/瓶 |
|
2 |
裂解液 |
异硫氰酸胍 |
1瓶 |
16mL/瓶 |
|
3 |
磁珠 |
二氧化硅 |
1管 |
0.6mL/管 |
|
4 |
DNA 消化酶 |
DNA酶 |
2管 |
1.5mL/管 |
|
5 |
洗液一 |
盐酸胍 |
1瓶 |
30mL/瓶 |
|
6 |
洗液二 |
氯化钠 |
2瓶 |
30mL/瓶 |
|
7 |
洗液三 |
乙醇 |
1瓶 |
30mL/瓶 |
|
8 |
洗脱液 |
Tris-HCl |
2管 |
1.5mL/管 |
【贮存条件及有效期】
贮存于2°C-30°C干燥的环境中，有效期限为24个月。
【适用仪器】
转速可达12000rpm以上的高速离心机、磁力架、迷你低速离心机、漩涡混合器。
【样本要求】
1. 样本类型：人体尿液样本。
2. 样本的采集：使用15ml离心管，按照生产厂家建议收集尿液10mL。尿液保存在4℃以下。
【操作步骤】
1、试剂准备
试剂盒使用前，请确保裂解液完全溶解无结晶析出。
2、样本准备(外泌体分离)
如果是冰冻的尿液样本，将其置于室温（15-30℃），待其完全融化后，将尿液放至低速离心机中，3500rpm离心15min，去除杂质；取上清转移到两个1.5ml离心管各1ml，每管分别加入400µL外泌体分离液，涡旋混匀10s，放至高速离心机中，12000rpm离心10min，吸除上清。（注意：要尽量吸除多余液体，以免影响核酸提取）
3、外泌体核酸的提取和纯化
3.1外泌体核酸裂解
向上述离心管分别加入155µL裂解液，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，室温静置5min后将两管混合液混合成一管共310µL，依次加入270µL乙醇、10µL磁珠，涡旋混匀10s，室温放置10min（每2min上下颠倒5次，使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
3.2核酸洗涤
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液一，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
3.3消化外泌体DNA
在离心管中加入60µL DNase，漩涡混匀器混匀10s，室温静置15min，待DNA消化完全；
3.3核酸RNA洗涤
结束后，向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液三，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
将上述1.5mL离心管低速瞬时离心，放置磁力架上，磁吸1min，吸走多余的废液，打开上述1.5mL离心管盖，室温干燥2min；
3.4核酸RNA洗脱
向上述1.5mL离心管中加入30-60µL洗脱液，盖紧管盖，涡旋混匀10s，室温静置3min，每隔1min用漩涡混匀器混匀5s（使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，把离心管放置磁力架上，磁吸2min，将试剂转移至新的1.5mL离心管，盖紧管盖。如果提取的核酸不立即使用，可将其置于-20°C以下储存。
【检测方法的局限性】
1、只能用于体外诊断。
【性能指标】
经本试剂盒提取的核酸，检测Ct值的CV≤5.0%。
【注意事项】
1. 实验前请仔细阅读本说明书。
2. 为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和黏膜；样本的处理建议在可防止气雾外流的生物安全柜中操作；样本制备区所用过的试管、吸头需打入盛有消毒剂的容器，并与废物一起灭菌后方可丢弃；样本操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
3.为保证实验结果的准确性和可靠性请使用已校准的移液器，选用合格的一次性使用的反应管、离心管、枪头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
4. 试剂盒组分需在效期内使用，不使用本试剂盒提供的组分进行实验将可能导致错误结果。
5. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格区分进行（试剂准备区、样本制备区、扩增区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用。
6. 完成样本核酸提取后，建议马上进行下一步实验，否则请保存于-20℃待用（24小时内）。
7. 实验结束后用10%消毒水和75%酒精处理工作台和移液器，然后用紫外灯照射20-30min。
粤穗械备20181281号
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文献和实验可通过传递信息影响目标细胞的功能，激活细胞信号通路，在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。外泌体可以作为临床诊断中的生物标志物或疾病治疗的靶点，同时也可以作为药物载体，参与神经疾病和癌症等多种疾病的病理过程。 三、关键步骤 — 外泌体分离 外泌体的分离纯度对外泌体的功能研究非常重要，但是外泌体的分离一直是困扰外泌体研究人员的一个难题。虽然分离外泌体方法有很多种，包括差速超速离心法（超离法）、超滤法、密度梯度离心法、免疫磁珠法、试剂盒法等。 但目前
过滤孔，导致膜的寿命减短，分离效率较低。同时，外泌体会粘附在膜上，导致产量降低。 免疫磁珠法：用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。该方法分离得到的外泌体的生物活性易受 pH 和盐浓度影响，不利于下游实验。 试剂盒分离法：目前商业化的外泌体提取试剂盒多种多样，提取效果良莠不齐。同时试剂盒本身的价格比较高，且外泌体的得率和纯度一般，不是性价比高的一种分离方法。此方法得到的外泌体对于后续的鉴定实验、细胞实验和动物实验等可能有影响。 五、如何鉴定外泌体
分化、肿瘤侵袭、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。 由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。 三、如何分离外泌体？ 外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加 FBS
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