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- 华尔纳生物
- WN-26305
- 武汉
- 2025年07月13日
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武汉华尔纳生物科技有限公司
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 原代细胞 |
生长特性 | 原代细胞 |
培养体系 | 专用完全培养基 |
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文献和实验我养过人类原代滑膜细胞，探讨传代经验：其实最好还是在细胞长满时、还没有接触性抑制之前传代为好1、预温0.25% trypsin， 0.02%EDTA2、用Ca－free的PBS洗涤贴壁细胞三次3、用1份0.25% trypsin， 0.02%EDTA和3份PBS室温下消化（不要用全量消化液因为对于细胞的悬浮作用不但未见有增强作用而且对细胞本身没有好处）4、在倒置显微镜下观察细胞悬浮情况，约有半数以上细胞开始漂浮就用移液管（滴管）移出，置入离心管中5、离心1000rpm，10min6、上清液移回
实验材料： 1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等； 2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100µg/ml链霉素，pH7.2； 3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清； 实验方法： 1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒； 2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中； 3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；
1500-2000转离心6分钟，最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接种到培养瓶中培养。8、必要时可做第三管细胞收集；并立即作原代滑膜细胞培养。9、每2-3天换液一次。体会：1、虽然国内外文献有组织块培养法获得滑膜细胞，但我试过，没有获得滑膜细胞，可能方法没掌握好或实验条件不同；2、我探索过用0.25% trypsin或0.25% trypsin＋ 0.02%EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化细胞或合用，只有单用
