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- 华尔纳生物
- WN-62136
- 武汉
- 2025年07月04日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
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- 细胞类型：
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- 肿瘤类型：
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- 供应商：
武汉华尔纳生物科技有限公司
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999
- 英文名：
CT26-ffluc2-GFP
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5
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快递
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 稳转细胞系 |
生长特性 | 贴壁生长 |
培养体系 | 专用培养基 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 | 1:2~1:4传代，每2～3天传代或换液一次。 细胞库无血清冻存液 |
细胞株构建流程 | 1.构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； 2.慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； 3.用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； 4.采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； 5.单克隆细胞株质检（COA）。 |
细胞备注 | 如混合稳转细胞株带抗性基因，建议每传8~10代用相应抗性药物筛选一次(杀稻瘟菌素：20μg/mL；嘌呤霉素：10μg/mL)；或在细胞培养过程中添加适当浓度的抗性药物以维持细胞株阳性率(杀稻瘟菌素：2μg/mL；嘌呤霉素：1μg/mL)。 |
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文献和实验水平规避过表达假象。 长期传代荧光丢失。 对策：传代时保持低浓度维持抗生素（筛选浓度的 1/2~1/4 或更低）、使用早代次细胞、重要实验前复核荧光比例。 Luciferase 信号不均一。 混合克隆里低表达细胞会稀释整体信号，体内成像数据波动大。做动物实验的 luciferase 株建议直接按单克隆交付，并用流式辅助挑取高表达群体。 这些设计决策在建株之前就要定好，返工的代价很大。吉凯基因的报告基因稳转株服务把这部分前置了：GFP/mCherry/Luciferase 等常用报告体系都有成熟载体方案
克隆 or 单克隆） --- 一、第一步：载体设计 载体元件由实验目的决定，逐项确认： 元件 选择要点 启动子 普遍高表达选 CMV、EF1α 等；需要模拟内源水平或避免沉默可考虑其他启动子 目的基因 CDS 序列；是否需要做 WB 决定是否加 Flag/HA 等融合标签 荧光标签 是否需要观察感染效率或做活细胞示踪（GFP/mCherry 等） 抗性基因 常用 puromycin（Puro），也可选新霉素（Neomycin）、杀稻瘟菌素（Blasticidin） 其他元件
1. 50 ml 离心管 2. 光谱仪 3. 紫外灯 4. 荧光显微镜 四、步骤 1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 ug/ml 庆大霉素（农杆菌株GV3101携带抗性），50 ug/ml 大观霉素（载体携带）。 2. 将1 ml 过夜培养的农杆菌转接到25 ml LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素，另外加入高压灭菌的乙酰丁香酮）。 3. 检测过夜培养的菌液OD600的值。 4. 5000 g，15
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