- ￥880 - 2380
- 华尔纳生物
- WN-34323
- 武汉
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
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- 细胞类型：
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- 肿瘤类型：
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- 供应商：
武汉华尔纳生物科技有限公司
- 库存：
999
- 英文名：
MC38-ffluc2-GFP
- 生长状态：
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- 年限：
5
- 运输方式：
快递
- 器官来源：
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- 组织来源：
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 稳转细胞系 |
生长特性 | 贴壁生长 |
培养体系 | 专用培养基 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 | 1:2~1:4传代，每2～3天传代或换液一次。 细胞库无血清冻存液 |
细胞株构建流程 | 1.构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； 2.慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； 3.用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； 4.采用无限稀释法筛选单克隆株； 5.单克隆株质检（COA）。 |
细胞备注 | 如混合稳转细胞株带抗性基因，建议每传8～10代用相应抗性药物筛选一次(杀稻瘟菌素：15μg/mL；嘌呤霉素：6μg/mL)；或在细胞培养过程中添加适当浓度的抗性药物以维持细胞株阳性率(杀稻瘟菌素：1.5μg/mL；嘌呤霉素：0.6μg/mL)。 |
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文献和实验1. 50 ml 离心管 2. 光谱仪 3. 紫外灯 4. 荧光显微镜 四、步骤 1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 ug/ml 庆大霉素（农杆菌株GV3101携带抗性），50 ug/ml 大观霉素（载体携带）。 2. 将1 ml 过夜培养的农杆菌转接到25 ml LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素，另外加入高压灭菌的乙酰丁香酮）。 3. 检测过夜培养的菌液OD600的值。 4. 5000 g，15
。它的优点是能构建同基因型的稳定细胞株，可以是多克隆稳定细胞株，无需单克隆筛选。 2）UCOE系统 产生背景 在G418、GS及DHFR三个筛选系统中，由于外源基因与宿主基因组发生的是随机非同源重组，当外源基因整合位置处于非转录活跃区或不稳定的区域时，外源基因会发生静默表达。为了克服位置效应带来的影响，提高筛选成功率及外源基因表达量，研究者通过基因工程的手段对表达载体进行改造。 UCOE系统——是Millipore公司推出的一套表达筛选系统，UCOE是一个小的DNA片段，源于看家基因的调控
基因。 4，问题4。单克隆化的时机和个数：加药筛选时, 一般等到确认的转染细胞长到70%以上时,再做有限稀释法, 以克隆出阳性细胞, 同时要保持适当的药物浓度,以防突变和污染。若细胞长好了,如有40%以上,就可以有限稀释了一般，筛选5，6个克隆就有需要的克隆，但保险起见，筛10个吧。 5，从单克隆化时开始，就要加大营养，清和生长因子。 单克隆化的操作方法； 1.方法1。单克隆细胞的培养就是这样的,我现在作了15个96孔板的单克隆,总共才得到大约50株单克隆在做时候应保证每个孔中的细胞
