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- 华尔纳生物
- WN-28615
- 武汉
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
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- 细胞类型：
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- 肿瘤类型：
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- 供应商：
武汉华尔纳生物科技有限公司
- 库存：
999
- 英文名：
A549-GFP-Puro
- 生长状态：
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- 年限：
5
- 运输方式：
快递
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 稳转细胞系 |
生长特性 | 悬浮生长 |
培养体系 | 专用培养基 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
冻存条件 | 1:2~1:4传代，每2～3天传代或换液一次。 细胞库无血清冻存液 |
细胞株构建流程 | 1.构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； 2.慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； 3.用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； 4.采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； 5.单克隆细胞株质检（COA）。 |
细胞备注 | 如混合稳转细胞株带抗性基因，建议每传8～10代用相应抗性药物筛选一次(2.5μg/mL)；或在细胞培养过程中添加适当浓度的抗性药物以维持细胞株阳性率(0.25μg/mL)。 |
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文献和实验1. 50 ml 离心管 2. 光谱仪 3. 紫外灯 4. 荧光显微镜 四、步骤 1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 ug/ml 庆大霉素（农杆菌株GV3101携带抗性），50 ug/ml 大观霉素（载体携带）。 2. 将1 ml 过夜培养的农杆菌转接到25 ml LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素，另外加入高压灭菌的乙酰丁香酮）。 3. 检测过夜培养的菌液OD600的值。 4. 5000 g，15
基因。 4，问题4。单克隆化的时机和个数：加药筛选时, 一般等到确认的转染细胞长到70%以上时,再做有限稀释法, 以克隆出阳性细胞, 同时要保持适当的药物浓度,以防突变和污染。若细胞长好了,如有40%以上,就可以有限稀释了一般，筛选5，6个克隆就有需要的克隆，但保险起见，筛10个吧。 5，从单克隆化时开始，就要加大营养，清和生长因子。 单克隆化的操作方法； 1.方法1。单克隆细胞的培养就是这样的,我现在作了15个96孔板的单克隆,总共才得到大约50株单克隆在做时候应保证每个孔中的细胞
，但保险起见，筛10个吧。 5、从单克隆化时开始，就要加大营养，血清和生长因子。 五、单克隆化的操作方法： 1、方法1.单克隆细胞的培养就是这样的，我现在作了15个96孔板的单克隆，总共才得到大约50株单克隆在做时候应保证每个孔中的细胞是一个，因此，我一般在200毫升的培养液中加入小于96个的细胞，这样平均到每个孔中因该可以由满意的结果你所说的现象我也遇到过，我也百思不得其解，只好做多一点的96孔板来补充。培养SPC-A1（人肺癌细胞），转染了EGFP，然后进行了G418抗性筛选和96孔板单克隆
