Erythropoietin/EPO Protein, Hu

Engineering a Human-Like Glycosylation to Produce Therapeutic Glycoproteins Based on 6-Linked Sialylation in CHO Cells

for sialic acid transfer has not yet succeeded in providing a human-like pattern of glycoforms to protein drugs. To date, there is a need for engineering animal cells and get highly sialylated products that resemble as closely as possible to human proteins

CHO细胞无血清培养

，使细胞密度达5×105个/m1。然后用等体积的CHO-S-sFM1I 将细胞稀释到3x 105个/ml，继续培养，重复上述操作，直至血清浓度降为0.1％后，用完全无血清培养基培养到3×106个/ml。再以3×l05个/ml接种，传50代，至此完成适应工作。（3）细胞计数参阅《组织培养技术4》的方法，用血球计数板计数。（4）CHO细胞表达EPO水平应用MIT比色法测定。4、无血清培养基的发展目前的无血清培养基已进入第三代，第一代无血清培养基虽然不含有血清，但含有大量的动物或植物蛋白，如BSA或激素

【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。

洗脱条件比较剧烈，最后收集的蛋白质很有可能变性，或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的Protein A 柱结合的重组蛋白质A一般具有5个串联结构域：E、D、A、B、C。这种重组蛋白A虽然除去了不重要的非结合域，仅由5个结构域组成，每个域均可以和IgG的Fc段结合，但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一，而且经常需要较低的pH值。如果减少串联结构域的个数，并且采取同型结构域串联，就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异，洗脱条件会温和而均一。为此，我们可以做一个试验，比较一下