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无锡莱弗思生物实验器材有限公司
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10 μL
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文献和实验,在中性和弱碱性条件下可以和固定化的金属离子相互作用(如Ni离子,Zn离子,Co离子等),从而达到纯化蛋白的目的。此系统的洗脱方式可以用过三种非特异性步骤达成: 降低pH(4.5-6) b. 加入EDTA C.不同浓度咪唑溶液(20-250mM) 当蛋白洗脱完毕后,使用EDTA使纯化树脂与金属离子分离,即可完成树脂的再生。 Strep-tag®则是基于链霉亲和素(Streptavidin)和生物素这一自然的相互作用,将Strep-tag®II(WSHPQFEK)或Twin-Strep-tag®
干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是蛋白-DNA 互作的一大革新技术,它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀,而是通过针对靶蛋白(如转录因子、染色质重塑蛋白)的抗体和 Protein A/G 的介导,使得与 Protein A/G 融合的 Tn5 酶(Tagmentase)在切割 DNA 片段的同时在序列两端加上测序接头,经 PCR 扩增后即可形成用于高通量测序的文库(见图 1 )。CUT &Tag 技术具有细胞投入量低、信噪
法的另一大特征是可使用高浓度镁离子令PA tag和NZ-1的结合发生分离,具体来说就是使用10 mM MES・3 M MgCl2(pH 6.0)将已使用并固定化NZ-1的抗体微珠再生利用。在如此温和的条件下再生抗体微珠,可增加抗体微珠的使用次数,大大降低成本。实际上,即使重复以上操作60次,得到的蛋白的量也不会有太大变化1)。图2:.在动物细胞表达系中表达的附加PA tag的蛋白结合量的评价表达有PA tag蛋白的培养上清液(c.cup)和在NZ-1琼脂糖珠上结合标签蛋白的滤过液
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