PKSI-527#信号通路

荧光共振能量转移

转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)，此时检测到的就是YFP的发射波长为527nm的荧光。检测到的荧光变化反映了分子内构象的变化，从而反映了蛋白质－蛋白质间的相互作用。2. 1 检测酶活性变化2. 1. 1 活细胞内检测蛋白激酶活性蛋白质磷酸化是细胞信号转导过程中的重要标志，研究其中的酶活性是研究信号通路的一个重要方面。以前酶活性测定主要是利用放射性以及免疫化学发光等方法，但前提都是要破碎细胞，用细胞提取物测定酶活性，还无法做到活细胞内定时、定量、定位的观测

【共享】待发表的综述：RNAi在药物最佳靶点筛选和鉴定中的应用

可以用来筛选与恶性增殖相关的基因和蛋白质以及确定调节增殖的信号通路，这些为肿瘤新药筛选及治疗提供了大量有用的信息。为了研究基因的功能，可以用上调基因表达的方法，但这种方法很难看到明显的现象，而沉默基因的表达却很容易观察到现象。基因敲除小鼠和显性负相技术都可行，但是十分昂贵不能用于大规模鉴定基因功能，RNAi技术可以直接在试管培养的细胞中应用，而且并不昂贵，因此可以在基因组内大规模高通量地鉴定基因的功能。这样在整个基因组范围内应用RNAi得到表型信息与肿瘤中异常增殖的细胞相联系就可以鉴别出能够作为抗肿瘤

荧光共振能量转移技术的基本原理和应用

nm的荧光；但当蛋白质a与b发生相互作用时，由于蛋白质b受蛋白质a作用而发生构象变化，使CFP与YFP充分靠近发生荧光共振能量转移，此时检测到的就是YFP的发射波长为527nm的荧光。将编码这种融合蛋白的基因通过转基因技术使其在细胞内表达，这样就可以在活细胞生理条件下研究蛋白质-蛋白质间的相互作用。二、FRET技术的应用随着生命科学研究的不断深入，对各种生命现象发生的机制，特别是对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用的研究变得尤为重要。而要想在这些方面的研究取得重大突破，技术进步又是必不可少的。一些传统