Cy3-N3#荧光染料

多色流式实验荧光染料的选择

较暗的染料。为了保证每个通道的分辨率可接受，我们需要合理搭配抗原和染料。一般来说，较暗的染料，如FITC、PerCP等，优先分配给表达量高的抗原，而PE、APC、PerCP/Cy5.5、PE/Cy5等较亮的染料可以分配给表达量低或者分辨率要求比较高的抗原。合理配色的最终结果是让不同表达水平的抗原检测到的信号尽量均衡。 3) 保证搭配荧光染料的质检发射光谱重叠度尽量小 如前所述，当两种荧光染料的发射光谱重叠时，它们的荧光信号将会互相干扰，给数据分析带来麻烦。虽然荧光补偿技术

优化流式配色的小技巧

光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。 激发和发射波长之间的差异称为「斯托克斯频移」，而在选择用于流式细胞实验的荧光素时，我们希望具有尽可能大的斯托克斯频移，以将发射光与激发光源可靠地区分开。因此，串联染料在这个意义上比单分子染料更有优势。 但是有些串联荧光染料也是有相当的局限性的，尤其是在多色流式实验时会更大概率出现荧光溢漏的问题。 例如，当使用 PerCP-Cy™5.5 染料时，我们可能认为只会在 488 nm 激发范围相关的通道中检测到信号，然而这实际上是错误的，因为该蛋白质会被 635

如何选择合适的流式抗体

抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低，实验程序少尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择： 如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PE最强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个