293T HCP ELISA检测试剂盒

293T HCP ELISA检测试剂盒说明书

货号：HG-HCP001

本试剂仅用于检测样本中293T HCP组分的含量。

产品简介：

本品采用双抗夹心法检测样本中293T HCP含量，将293T抗体预包被在微孔板上，将标准品与待测样本加入到已包被的反应孔内进行孵育。存在的293T蛋白会定量的与微孔板中的抗体结合，洗涤除去未结合物，加入生物素标记的抗293T蛋白抗体，最后加入亲和素标记HRP，形成抗体-抗原-生物素抗体-酶标亲和素复合物，通过TMB显色程度指示样品中蛋白含量。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。
检测范围： 37-27000 ng/mL
定  量  限： 37ng/mL
精  密  度： CV%≤10%, RE%≤±15%

规格：

96 T

应用：

本试剂盒采用双抗夹心法定量分析以293T为表达细胞的生物药中宿主蛋白杂质，可检测293T宿主蛋白杂质所需要的全部组分。

产品组成：

组分	规格	配制
293T HCP Coated Plate（包被酶标板）	8孔×12条	即用型
Anti- 293T HCP -Biotin（检测抗体 100×）	150μL×1管	1：99用稀释缓冲液稀释
Streptavidin HRP( 酶结合物 10×）	375μL×3管	1：9用稀释缓冲液稀释
293T HCP Standard（标准品）	600μL×1管(81ug/mL)	按建议稀释方式操作
Diluent Buffer （稀释液）	1g×1瓶	用 1×PBS-T 现配现用（1g/100ml）
10×PBS-T Wash Buffer （10×PBS-T洗液）	50mL×1瓶	1：9用去离子水稀释
TMB Substrate（显色液）	15mL×1瓶	即用型
Stop Solution（终止液）	15mL×1瓶	即用型
封板膜	5张	即用型
说明书	1份	即用型

产品储存条件与有限期：

2~8℃避光保存，有效期8个月。

需要准备材料：

◆ 酶标仪
◆ 去离子水
◆ 微孔板恒温振荡器
◆ 全新滤纸
◆ 微量加液器及吸头
◆ 涡旋振荡器

试剂配制：

1.平衡： 将所需试剂移到室温（18~25℃）平衡30分钟。
2.配液：
➀1×PBS-T 洗涤液：计算实验所需工作液体积，取适量 10×PBS-T 洗液，用去离子水进行 10 倍稀释，混匀后备用；
➁稀释液工作溶液：根据实验需求取适量稀释液干粉按（1g/100mL）的比例，用 1× PBS-T 溶解混匀，也可一次性稀释后分装，放置 -20 ℃保存。避免稀释液反复冻融。
③检测抗体工作液：计算实验所需工作液体积，取适量生物素抗体用稀释液进行100倍稀释，充分混匀备用；
④酶结合物工作液：计算实验所需工作液体积，取适量酶结合物用稀释液进行10倍稀释，充分混匀备用；
⑤标准品及样品使用稀释液进行稀释。
3.标准品稀释：

管号	标准液浓度 (ng/mL)	标准液体积 (μL)	稀释液体积 (μL)	总体积 (μL)	终浓度 (ng/mL)	剩余体积 (μL)
8	81000	110	220	330	27000	220
7	27000	110	220	330	9000	220
6	9000	110	220	330	3000	220
5	3000	110	220	330	1000	220
4	1000	110	220	330	330	220
3	330	110	220	330	110	220
2	110	110	220	330	37	330
1	/	/	220	220	0	220

实验步骤：

1.使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生气泡。
2.根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回含干燥剂的铝箔袋，密封。
3.加样: 每孔加入100μL标准品、样品、阴性对照至相应孔中。用封板膜封板后在室温（18~25℃）下反应1.5h。

4.洗涤: 弃去各孔内液体，用1×PBS-T洗涤液注满微孔（250μL/孔），静置30秒后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在滤纸上拍干。
5.加生物素检测抗体工作液: 每孔加生物素检测抗体工作液100μL，用封板膜封板后室温（18~25℃）下反应45分钟。
6.洗涤: 弃去各孔内液体，用1×PBS-T洗涤液注满微孔（250μL/孔），静置30秒后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
7.加酶结合物工作液: 每孔加酶结合物工作液100μL，用封板膜封板后室温（18~25℃）下反应30分钟。
8.洗涤: 弃去各孔内液体，用1×PBS-T洗涤液注满微孔（250μL/孔），静置2 min后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
9.显色: 每孔分别加底物显色液100μL，轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃避光显色15分钟。
10.测定: 每孔加终止液100μL，轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm，测定各孔吸光值（OD值）。

结果分析：

本产品建议采用四参数的拟合方式进行线性拟合及计算。

标准曲线OD处理（见下例，仅为示例，具体以实际测定为准）：

标准品浓度(ng/mL)	O D 值 ( 1 )	O D 值 ( 2 )	平均值
27000	2.507	2.494	2.501
9000	1.73	1.733	1.732
3000	1.126	1.111	0.119
1000	0.773	0.77	0.772
330	0.496	0.475	0.486
110	0.289	0.285	0.287
37	0.205	0.195	0.200
0	0.140	0.137	0.139

以标准品理论浓度与对应OD值进行四参数拟合，得到标准曲线（如下图所示）

注意事项

1. 试剂应按标签说明储存，使用前室温（18-25℃）平衡。
2. 预包被板条使用前，请平衡至室温再打开外包装袋，实验中不用的板条应立即放回包装中密闭封口， 4℃可保存一个月。
其余不用试剂应包装好或盖好。
3. 标准品、生物素及酶结合物体积量很小，使用前请短暂离心，以使管壁或管盖的液体沉积到管底。
4. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
5. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7. 底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。
8. 本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。