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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
美国GENMED品牌主营业务包括有:细胞培养(Cell Culture)试剂技术、分子技术、蛋白化学技术、免疫抗体技术、医学技术、生物化学技术、模式生物技术、微生物技术、植物技术、载体技术、毒理技术、营养技术、平台技术、生物分类学(taxonomy)分析技术等20余项,详细的项目可以咨询在线客服!
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文献和实验。因此,在M9/SD/-Trp培养基上,只有含有AD-文库质粒的转化菌才能生长,将其扩增、并抽提质粒DNA,酶切鉴定。 9-3. 用pLexA-靶DNA与pB42AD-库DNA一一对应、共转化只含有报告基因的酵母菌EGY48中,先到SD/-His/-Trp/-Ura板扩增,并与后面的诱导板形成对照,说明报告基因的表达与诱导AD融合蛋白的表达有关,再确证LacZ、Leu报告基因的表达。 9-4. 扩增与靶DNA相互作用的文库DNA,进行序列分析及进一步的结构、功能研究。
1. 阳性克隆的筛选 (1)随机选取50个阳性克隆,扩增、抽提酵母质粒,电转化E.coliKC8宿主菌,抽提大肠杆菌中的质粒,酶切鉴定是否具有插入片段及排除相同的文库质粒。 (2)如果重复的插入序列较多,可另取50个阳性克隆来分析。最后得到数种片段大小不同的插入序列,再转化新的宿主细胞,检测是否仍为阳性克隆。2. 用质粒自然分选法(Natural Segregation)筛除只含有AD-文库杂合子的克隆 (1)将初步得到的阳性克隆接种SD/-Trp/-Ura液体培养基,培养
ml。 室温保存1-2个月。 **也可以所有组分一起灭菌,但是可能会发生焦化作用,然而焦化作用不会引起任何问题。 生长选择合成培养基(Selective Growth Synthetic Media) 2x (SD – CAA) 1)用于EBY100菌株配套 pYD 系列载体 ,或者二配体酵母配套pPNL20 和pPNL30 载体 10 g/L 酪蛋白水解物casamino acids (-ade, -ura, -trp
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