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美国GENMED品牌产品由国际优秀留美博士团队创建的生物医药科技企业。公司总部位于美国生物医药之谷波士顿地区。公司创办人在美国深造、研究、工作和创业十三余年,曾任美国哥伦比亚大学肿瘤遗传研究院的研究员,负责主持美国卫生部、农业部和能源部的多项重大科技项目。
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文献和实验摘要: 下文为大家介绍质粒的酵母直接转化的方法. 试验试剂: PLATE溶液: iZN ;40% 聚乙二醇 (PEG,分子量3350;Sigma P 3640);0.1mol/L 醋酸锂 g;10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5);1 mmol/L EDTA; 实验步骤:1、用牙签从平板中挑取单菌
8.35 未污染的新鲜、试剂级DMSO,-70℃保存 注: 缓冲液A、B、C均用滤膜过滤,-20℃保存; 将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化,建议按6样品/组进行); (2)待转化毕氏酵母的制备 接种环接种Pachia pastoris于YPD平板,30℃培养2d; 挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中,30℃振荡培养过夜; 取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养
酵母菌落直接质粒转化法 1. 用牙签从平板中挑取单菌落(直径 2 ~ 3mm ),转移到 1.5ml 的无菌离心管中。 2. 将 10 μ l 载体 DNA ( 100 μ g )与 10 μ l 转化质粒 DNA 混合,振荡均匀。(若转化 DNA 是用未经 RNA 酶处理的“ mini - prep DNA ”方法制得,则不需加载体 DNA )。 3. 加 0.5ml PLATE 溶液,振荡。
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