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文献和实验【五分钟讲实验】F-actin 怎么看?一篇讲清鬼笔环肽染色和避坑要点
、通透后的细胞或组织切片,不适合作为普通活细胞长时间染色试剂。 二、为什么它能把细胞骨架点亮? 肌动蛋白有两种常见状态:一种是游离的G-actin,像散落的零件;另一种是聚合后的 F-actin,像一根根细长的支架。 鬼笔环肽对 F-actin 有很强的亲和力,结合后会稳定微丝结构。只要给鬼笔环肽接上荧光染料,它就能沿着 F-actin 分布发光,于是细胞边缘、应力纤维、伪足、胞质骨架网络都能被看见。 鬼笔环肽不是把整个细胞都染亮,而是专门沿着 F-actin 微丝“描边
。微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维(F-actin),直径为6~7 nm,又名肌动蛋白丝,其长度不定,多分布在近细胞膜 的下方。微丝在不同种类的细胞中,它们又与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构,如张力纤维(stress fiber)、肌肉细丝、肠上皮绒毛轴心等。现在观察微丝可以用电镜、组织化学、免疫细胞化学等手段。本实验用普通光镜观察到细胞骨架,是因为骨架纤维成束分布、结构经染色后,有夸大作用。由于细胞经TritonX-100抽提后剩下的主要是细胞骨架成分,使得显现更清晰。 细胞骨架
靶点介绍 β-actin(β-肌动蛋白)是真核细胞中高度保守的非肌肉细胞骨架蛋白,是哺乳动物6种肌动蛋白亚型之一,由ACTB基因编码,人类该基因定位于7号染色体短臂(7p22.1)。作为细胞骨架微丝(肌动蛋白丝)的核心组成成分,β-actin通过动态聚合与解聚形成微丝网络,为细胞提供核心机械支撑,是维持细胞形态、极性及细胞间连接(如粘附连接、紧密连接)的关键分子。 β-actin参与调控的细胞生命活动贯穿细胞周期全程,在细胞运动与侵袭中,通过微丝重组介导细胞伪足形成与收缩,支撑细胞
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