NCI-h1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞_NCI-h1869

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞产品基本信息

细胞名称：NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞

种属来源：人

组织来源：肺

细胞形态：淋巴母细胞样

生长特性：贴壁、悬浮混合生长

培养基:：1640+10%FBS+1%PS+50nM氢化可的松+1ng/mlEGF+1%ITS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

 

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞培养操作

 

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

 

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、收集细胞培养上清：抽出瓶中的培养基和悬浮的细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清，细胞重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

b、剩下贴壁的细胞，用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗细胞1次。

c、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加少量培养基终止消化。

d、按3mL/瓶补加培养基，轻轻打匀吹下细胞后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

e、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养中。(第一次传代建议一个满的T25传一个10cm或者2个T25)。

 

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞冻步骤

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集NCI-H1869细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心5 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加 1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。

b、根据NCI-H1869细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

NCI-H1869人非小细胞肺癌鳞癌细胞培养注意事项

1. 收到NCI-H1869细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解NCI-H1869细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6. 该NCI-H1869细胞仅供科研使用。

7. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

8.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

悬浮细胞收货注意事项：

1、收货时需镜下拍照(看密度、状态)

2、静置后需镜下拍照(看整体密度)

a.如密度50%以下，建议换液并竖瓶培养

b.如密度50%-80%，建议换液培养，隔天观察密度

c.如密度90%，建议传代

3、换液及传代处理前，培养瓶竖着放置至少半小时(使细胞沉到瓶底);收集上清，必须将瓶内所有培养基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)润洗瓶底并收集!离心转速为1000rpm，5min。