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- 文献和实验
- 技术资料
一、动物选择与分组
- 动物品系:常用健康雌性SD大鼠(6-8周龄,体重200-250g)或Wistar大鼠。
- 分组设计:通常分为空白组(无处理)、模型组(P. acnes注射)、生理盐水对照组,部分研究增设治疗组(如药物干预)。
二、模型构建步骤
1. 菌液制备
- 菌种选择:痤疮bing酸杆菌(P. acnes),需在厌氧条件下培养增殖。
- 灭活处理:菌液经95℃水浴灭活15分钟,调整浓度为6×10⁸ CFU/ml(生理盐水稀释)。
2. 诱导方法
- 单次注射法:在大鼠双侧外耳廓中央皮下注射50μl灭活菌液,注射后标记位置。
- 连续注射法:部分研究连续3天注射菌液(50μl/次),增强炎症反应。
- 油酸预处理:部分模型先涂抹50%油酸(0.2ml/次)7天诱导毛囊角化,再注射菌液模拟复合病理过程。
3. 模型验证
- 微生物检测:注射24小时后取耳廓组织进行细菌培养,确认P. acnes感染。
- 组织病理学:7天后处死大鼠,取耳廓组织进行HE染色,观察炎症细胞浸润、毛囊扩张及脓肿形成。
- 炎症因子检测:通过RT-PCR或ELISA检测TNF-α、IL-6、MMP-2等基因或蛋白表达水平。
三、实验干预与评估
- 治疗组设计:模型成功后分组干预,如局部注射干细胞上清液、药物涂抹(如三黄凝胶、异维A酸等)。
- 疗效评估:
- 肉眼观察:记录耳廓肿胀、丘疹、脓疱等皮损程度。
- 分子机制:检测TLR2/4、IFN-β等信号通路相关因子,分析抗炎机制。
四、关键参数与注意事项
- 菌液浓度:过高可能导致急性坏死,建议控制在6×10⁸ CFU/ml以内。
- 注射部位:需精准定位外耳廓皮下,避免穿透皮肤或损伤深层组织。
- 模型稳定性:油酸预处理可增强角化异常,但可能延长造模周期(需14-28天)。
- 伦理规范:实验需符合动物福利标准,减少疼痛与感染风险。
五、模型优缺点
- 优势:操作简便、成本低,能较好模拟痤疮炎症反应。
- 局限性:难以完全复制人类痤疮的复杂病理(如雄激素调控),需结合多因素诱导。
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