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48T
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
人凝血因子Ⅷ(F8)ELISA Kit
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
人凝血因子Ⅷ(F8)ELISA Kit5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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(NO) 由一氧化氮合酶 (NOS) 的三种亚型产生,它是一种化学信使,与游离半胱氨酸残基反应形成 S-硝基硫醇 (SNOs)。Snitrosylation 是细胞用来稳定蛋白质、调节基因表达和提供 NO 供体的关键 PTM,SNOs 的生成、定位、激活和分解代谢受到严格调控。S-亚硝基化是一种可逆反应,SNOs 在细胞质中的半衰期较短,因为宿主的还原性酶,包括谷胱甘肽 (GSH) 和硫氧还蛋白 (thioredoxin),即脱硝酰基蛋白。因此,SNO 通常储存在膜、囊泡、组织间隙和亲脂性蛋白褶皱中,以保护其不脱
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