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T25





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文献和实验。有实验表明, GFP 在哺乳动物细胞(CHO) 内的长期(30 周) 表达对细胞的生长发育没有产生不利影响, 这表明, 它不但可以作为一个瞬时表达用的标记物, 而且也完全可以用于长久的高水平表达的标记物。生产转基因动物的常用方法是微注射法,但其效率非常低。采用gf p 作为报道基因能有效和方便地在桑椹期及胚泡阶段检测到GFP 的表达, 从而有效地建立起转基因动物的筛选系统, Takada 的实验还表明不但GFP 本身对胚的发育无害, 同时每天用470 - 490nm 光检查对胚的发育亦没有影响
量下调时,C24ORF17和BARD1对凋亡调控有关的一组378个基因的影响。进一步试验了已经在细胞周期检测预制多孔板中分析过的DONSON和GDF3基因对19个管家基因的RealTime ready参照基因检测板的潜在影响,然后利用对于管家基因的分析结果进行实验数据的标准归一化。 此外,对所有检测板,在所分析基因在转染siRNA后的内源性表达方面的变化与作为对照的转染siRNA靶向GFP的HeLa细胞中的表达进行比较。材料和方法细胞培养HLR-CHOP细胞(Stratagene)在37℃
不到瞬时转染细胞中的GFP表达,该怎么办? 1) 确定检测的方法正确,例如滤波片的设置; 2) 如果转染的是重组质粒,先用空白的质粒(无插入片段)作为对照,以确定检测方法正确; 3) 如果是重组质粒,对质粒与插入片段的连接处测序,确定阅读框正确; 4) 换一种转染细胞,常用的细胞有HeLa, COS, HEK293, CHO-K1, NIH3T3; 5) 优化转染条件,例如质粒量、转染试剂、转染时的细胞丰度。 2、 挑选了稳定表达GFP的克隆,培养后,发现荧光变弱或是不稳定,可能的原因
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