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- BHcell（博辉生物）
- D7148
- 2025年07月10日
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- 文献和实验
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- 规格：
2ug
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文献和实验蛋白是相当重要的；同时可以纯化出那些完整表达的蛋白，一些在翻译过程中容易造成“暂停”现象的蛋白就不用怕纯化产物里含有不完整的产物。融合了6×组氨酸标签的有pQE-60和pQE-70，融合了6×His-DHFR的有pQE-16。 顺式抑制载体 pQE系列的表达载体一般情况下需要在M15菌株中进行表达的，但是设计的pQE80L系列就没有这种约束，它可以在任意大肠杆菌株中进行表达。这与一般的pQE载体利用M15中质粒pREP4的反式lacI抑制子调控不同，它是利用顺式lacIq调控产生大量lac抑制
出所需的重组质粒。 仪器、材料与试剂 一、仪器 1．恒温摇床 2．恒温水浴 3．恒温培养箱 4．小型高速离心机 二、材料 1． 氨苄青霉素 2． BamHI 3． HindIII 4． T4 DNA连接酶 5． pQE-31 和pUC18-CAT 质粒 6． 培养皿 7． 接种针 8． 金属涂棒 9． 1.5mL 离心管 10．酒精灯 11．镊子、灭菌牙签等 三、试剂 DNA琼脂糖胶纯化试剂盒 实验步骤 一、质粒
后，2000倍稀释大量培养。 含有疏水基团的重组蛋白往往对宿主菌有毒性。因此，除非有特殊的意义，应当去除插入片段中编码信号肽序列或穿膜区的序列。然而，也有少数包含信号肽的蛋白可以在膜间质少量的表达。这种情况下，建议诱导前培养温度降低为25度。 有些蛋白，尤其是小于10KDa的蛋白在E. coli中不稳定，可能很快被细菌中的蛋白酶降解。克服这种困难的方法包括：降低培养温度到30度；使用一种或多种蛋白酶缺陷的宿主菌；使用QIAGEN公司的表达质粒pQE-16、pQE-40，使生成目标多肽与DHFR的融合
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