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- BHcell（博辉生物）
- D6710
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
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2ug
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文献和实验感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 （2）服务流程 1）含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取； 2）慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞； 3）培养48~72h，收集培养上清； 4）病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）； 5）滴度测定、目的基因检定 6）将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。 客户提供 1）表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要
酶活性；2. 10×CIP 缓冲液和 1U CIP，混合后，37 ℃ 孵育 30～60 min，然后 75 ℃ 加热 15 min 灭活 CIP 活性；3. 琼脂糖凝胶电泳分离并纯化目的 DNA 片段用于连接反应。（二）连接反应【实验试剂与器材】1. T4 DNA 连接酶2. 10×T4 连接酶缓冲液【实验方法与步骤】反应体系：质粒 DNA (0.5(g/? 滋 l) 2? 滋 lDNA 插入片段 (300ng/? 滋 l) 5? 滋 l10× 连接缓冲液 1? 滋 lT4 DNA 连接酶 1? 滋 l加水
的方法进行质粒DNA的提取，所用具体试剂见表1: ①挑取单菌落，接种于4. 0mlLB (含氨苄青霉素)液体培养基中， 37℃、250 rpm振荡培养过夜(约12～14h) 。②取1. 5ml培养物加入Eppendorf管中，室温12000g离心1min，弃上清。③将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ中，剧烈振荡，使菌体分散混匀。④加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒数次混匀(不要剧烈振荡) ，并将离心管放置于冰上2min。⑤加入150μl预冷的溶液Ⅲ，将管温和颠倒数次混匀冰上放置3min。⑥加入
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