pX601质粒

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

【求助】腺病毒质粒

hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒，邮寄过来的，拿到后，我该怎么办？多谢！ freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的，将滤纸减碎，然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心，取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。 whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯

CRISPR

和 sgRNA 用慢病毒或者质粒进行转染、或者直接注射 DNA/RNA，甚至直接转染蛋白复合体等。 Cas9 蛋白就能靶向感兴趣的基因座，并产生双链切口 (DSBs)，然后切口会被细胞本身的修复机制所修复。 非同源末端连接修复 (NHEJ) 就是其中一种，而 NHEJ 是一种易错修复途径，通常会引起少量插入或者缺失突变，开放阅读框 (ORF) 就会被破坏，这个基因就被灭活了。 同源重组修复 (HDR)，通过在 Cas9-sgRNA 组分中加入一个供体 DNA，供体 DNA