钙离子荧光探针, 2mM（Fluo-3, AM ester）

产品概述：
产品名称：Fluo-3, AM ester（钙离子荧光探针, 2mM）
产品规格：50 μL
产品应用方向：钙离子测定试剂
产品保存条件：-20℃ 干燥避光保存，有效期见外包装。
产品运输条件：冰袋
保质期（月）：36
Ex/Em：506/526 nm（结合 Ca 2＋后）
CAS 号：121714-22-5
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.9
分子结构图：


产品介绍：
Fluo-3, AM ester 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。 Fluo-3, AM ester 进入细胞后可以被细胞内源性酯酶剪切形成 Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3 可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光。

使用方法：
1. 将溶液形式的Fluo-3, AM ester储液取出于室温回温。 2. 用PBS或HBSS等缓冲液稀释Fluo-3, AM ester储液，制备 4 μM的Fluo-3, AM ester工作液。注：为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度。 3.（可选）如果Fluo-3, AM ester进入细胞的效果不好，可向 Fluo-3, AM ester溶液中加入适量20 % Pluronic F-127溶液，防止Fluo-3, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-3, AM ester 进入细胞，Pluronic F-127终浓度控制在0.04-0.05 %。注：（1）20 % (w/v) 的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20 % (w/v)的 DMSO母液。溶解需要在40-50℃加热20-30 min。溶解后室温保存，勿冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。（2）Pluronic F-127可降低Fluo-3, AM ester的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。 4. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用PBS或HBSS溶液洗涤细胞3次。 5. 去除缓冲液，将Fluo-3, AM ester工作液加入细胞中，37℃ 培养10-60 min。注：如果首次实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试37℃ 孵育20 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。 6. 去除Fluo-3, AM ester工作液，用PBS或HBSS等缓冲液洗涤细胞3次，然后用PBS或HBSS等缓冲液重悬细胞，制成 1×105 cells/mL的细胞悬液。 7. 37℃培养10 min，确保AM ester体在细胞内的完全去酯化作用。 8. 进行荧光钙离子检测。

注意事项：
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题解答：
1. 如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解 AM ester 体，从而降低 Fluo-3, AM ester 进入细胞的效果。另外，含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. Fluo-3, AM ester 容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后开封。由于试剂极微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
4. Fluo-3, AM ester 遇水极易分解，如果不能一次用完，建议将储液小量分装保存。