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- 2026年03月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
一、冠状动脉结扎法（最接近临床病理）
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适用场景
适用于急性心肌梗死或慢性心肌缺血研究，尤其适合需要明确缺血范围的药效评价。 -
操作步骤
- 麻醉与备皮：使用10%水合氯醛（0.3-0.4 mL/100g）腹腔注射麻醉，胸部剃毛消毒。
- 气管插管：连接小动物呼吸机（呼吸频率60-90次/分钟，潮气量3-14 mL/kg）。
- 开胸与结扎：
- 左胸第3-4肋间钝性分离进入胸腔，暴露心脏及左冠状动脉前降支（LAD）。
- 使用6-0缝合线在左心耳下方2-3 mm处结扎LAD，以心肌苍白、心电图ST段抬高为成功标志。
- 关胸与恢复：逐层缝合，术后注射青霉素预防感染，持续监测心电图。
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注意事项
- 建议分步结扎（首次部分阻断血流，二次完全结扎）以减少室颤风险。
- 选用250-300g雄性SD或Wistar大鼠，耐受力更强。
二、药物诱导法（操作简便）
- 常用药物及剂量
- 垂体后叶素（Pit）：30 μg/kg腹腔注射，连续3次（间隔24小时）引发冠状动脉痉挛。
- 异丙肾shang腺素（ISO）：5 mg/kg尾静脉注射，连续5天导致心肌坏死。
- 评价指标
- 血清肌酸激酶（CK）、CK-MB升高，心电图ST段偏移，病理切片显示心肌坏死。
三、高脂饮食联合手术/药物法（模拟动脉粥样硬化）
- 模型构建流程
- 高脂饲料配方：10%猪油、2%胆固醇、0.5%胆酸钠、87.3%基础饲料，喂养6-8周。
- 联合干预：
- 高脂饮食后结扎冠脉（增强斑块稳定性）。
- 或腹腔注射垂体后叶素诱导急性缺血。
- 优势
可模拟冠心病痰瘀互结证等中医证候，适用于中西医结合研究。
四、病证结合模型（中医研究常用）
- 心阳虚证模型
- 结扎冠脉后，灌服寒凉中药（如大黄）或限制活动，观察血小板活化（GPⅡb/Ⅲa、GMP-140升高）及心功能下降。
- 气虚血瘀证模型
- 疲劳跑步（力竭运动）联合冠脉结扎，通过控食、运动耗气，导致EF值下降、BNP升高。
五、模型评价指标
- 功能检测：超声心动图（EF、FS值）、心电图ST-T改变。
- 生化指标：血小板聚集率、TXA2/PGI2比值、心肌酶谱（CK-MB、cTnI）。
- 病理学：TTC染色测梗死面积，电镜观察血小板形态。
六、方法选择建议
- 机制研究：优先选择冠脉结扎法，病理过程最接近临床。
- 药物筛选：高脂饮食联合药物法成本低、周期短。
- 中医证候：需结合行为干预（如疲劳、寒凉刺激）模拟证候特点。
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文献和实验Nature：基于CRISPR/Cas系统通过直接注射单细胞的胚胎来介导大鼠基因编辑
修饰动物模型的有效方法。近来，高效、便捷的CRISPR/Cas 系统的出现，替代了上述技术。我们利用CRISPR/Cas系统，通过直接向单细胞胚胎注射多基因的靶点RNAs，成功构建了多基因突变的大鼠模型，从而证明Cas9介导的基因编辑技术在构建多基因多靶点的突变大鼠模型过程中的高效性。在此我们系统性地描述了构建基因敲除和敲入大鼠的流程。这为筛选基因靶标、合成向导RNAs、设计和构建同源重组模板载体、胚胎显微注射、鉴定F0代大鼠及其后代的基因突变与插入提供了指导方法。使用这一方法，从靶标设计到F0代
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麻醉，无菌状态下，分离左肾动脉，用一间隙为0.25mm的U型银夹使左肾动脉部分狭窄，右肾及动脉不触及，制造2K1C大鼠模型。对照组大鼠施以假手术，除不结扎肾动脉外，其他操作相同。术后大鼠普通饲料喂养，术后约3d动物恢复正常，之后每周末按前述方法测收缩压。术后4周筛选出SBP>140mmHg的大鼠，改用高果糖饲料喂养4周。高果糖饲料中三大能量物质按热卡计算：糖占75%，脂肪占12%，蛋白质占13%；普通饲料中糖占60%，脂肪占11%，蛋白质占29%。1.4 糖耐量实验 在8周末，大鼠空腹过夜，第二天早晨
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