SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×,pH8.8)，RC622

碱裂解法大量提取质粒（500mL菌液）

/L Tris-HCl、pH8.0，0.01mol/L EDTA、pH8.0。 配制方法：按上述各物质终浓度，把各自均配制成十倍浓度的溶液，配制溶液Ⅰ时，取三种十倍溶液各1体积于一容器中，定容至10体积即得溶液Ⅰ。 配制体积 500mL 1000mL (1)葡萄糖(M=198.17)： 0.05 mol/L 4.954g 9.909g 10倍： 0.5 mol/L 49.54g 99.09g (2) Tris-HCl(M=121

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

的，可以用SDS-凝胶电泳法测定其分子量。 SDS-PAGE有连续体系及不连续体系两种，这两种体系有各自的样品溶解液及缓冲液，但加样方式，电泳过程及固定、染色与脱色方法完全相同。三、器材与试剂： 1．器材： ①夹心式垂直板电泳槽，凝胶模（135×100×1.5mm）（北京六一仪器厂）　　②直流稳压电源（电压300～600V，电流50～100mA）　　③吸量管（1，5，10ml）              　　④烧杯（25，50，100ml）　　⑤细长头的滴管                      

SDS-PAGE电泳常见问题分析

1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起