真菌保存液Ⅱ，RC61557-100ml

细胞内细胞因子染色步骤

一、样本准备 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300g 离心 5 min，弃上清。 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含1%BSA的PBS)，用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL。 三、设置实验分组 根据实验设计，设置实验分组，每管加入 100μL 细胞悬液。 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

实验采用10只2-3周龄SD大鼠，雌雄均可，体重40~60 g。 1.2 试剂 纤连蛋白（fibronectin），Ⅳ型胶原，鼠尾胶，葡聚糖（dextran，分子量100~200kDa），DNA酶Ⅰ（DNaseⅠ）购自Sigma公司；D-Hanks液，PBS，10×PBS按配方自制；Ⅱ型胶原酶购自Worthington公司；明胶，牛血清白蛋白（BSA），HEPES购自Amresco公司；Percoll购自Amersham Biosciences；DMEM（高糖）购自Gibco BRL公司；肝素

PCR－RFLP分析技术

/ml。小心混匀并倒在有机玻璃内槽中，控制灌胶速度，使胶液缓慢展开，避免产生气泡，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。室温下静置1小时左右，待胶凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的样品槽。 （3）将凝胶放入电泳槽中，加入恰好没过胶面1 mm 深的足够电泳缓冲液，预电泳10 min。 （4）每份限制酶切产物取10 μl，加2 μl 6×上样缓冲液，混匀后加入到样品孔中，以100 V 电泳50分钟。 （5）断电后取出凝胶，放在紫外透射仪中观察并记录PCR—RFLP结果。四