氯化钙细菌感受态制备液，RC61910-100ml

手把手教你做好体外 DNA 重组

.Na2,（pH8.0）2. 细菌裂解液: 0.2 mol/L NaOH，1% SDS3. 中和液: 60 mL 5M 醋酸钾，11.5 mL 冰醋酸，28.5 mL 双蒸水4. 3 mol/L NaAc (pH 5.2)5. TE 饱和酚 (pH8.0)6. 氯仿/异戊醇 = 24:17. RNase（20 mg/mL）【实验方法与步骤】（一）质粒的小量制备:1. 将 5 mL LB 培养液 (含筛选抗生素) 加入到容量为 15 mL 并通气良好的试管中，然后将转化菌的一个单菌落接种于培养

大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化

5mlLB培养基中，于37℃培养3－5小时 3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2－3小时，到OD600＝0.3－0.4感受态细胞制备: 4.将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min 5.4000rpm离心5min,弃上清 6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，冰上预冷10min 7.4000rpm离心5 min,弃上清 8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总体积15％的甘油 可－70℃长期

大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选

体总数＝菌落数×（转化反应原液总体积/涂板菌液体积）插入频率＝蓝色菌落数/白色菌落数转化频率＝转化体总数/加入质粒DNA的量（计算出每微克的转化菌落数）4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)       (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测