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- 文献和实验
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- 保存条件:
低温运输,4℃保存,3个月有效。
- 库存:
现货
- 供应商:
联硕生物
- 规格:
100ml
注意事项:无菌溶液。主要由HEPES、乙酸钾、0.1M山梨醇、EDTA等组成。经过滤除菌处理。
储运及效期(运输/储存/有效期):低温运输,4℃保存,3个月有效。
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文献和实验本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)EDTA 50mmol/L (pH8.0)NaCl 500 mmol/L灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol
2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
制成50% 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子,4℃ 振荡 10 min,进行预清除。 4℃,10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子,转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法(考马斯亮蓝染色法)测定上清蛋白浓度。(应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定,这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用)。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度,用 PBS
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