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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20摄氏度
- 保质期:
3个月
- 英文名:
pLV3-U6-Adar-sgRNA1-Cas9-puro Plasmid
- 库存:
100
- 供应商:
LSM BIO
- 规格:
2ug
pLV3-U6-Adar-sgRNA1-Cas9-puro Plasmid
Catalog No.: PVT82923
pLV3-U6-Adar-sgRNA1-Cas9-puro Plasmid
Alias:GGGCCATTGTGATAAGCGTG
Host: Mammalian cells,lentivirus
Use(s): gene edit
Fragment Type: CRISPR
Fragmented species: Mouse
Prokaryotic resistance: Amp
Screening Markers: Puro
Fluorescence labeling:
Promoter: U6
Competent cells: Stbl3
Temperature: 37Celsius
Caution:
1. This product is FOR RESEARCH USE ONLY!
2. The item is lyophilized form, Please take the powder plasmid by centrifugation at 5000rpm/min for 1min. Add 20μl ddH2O in to the tube of plasmid.Take 2ul plasmid into 100 μ L corresponding competent cell, centrifugal then full coating on plate.
3. Shipping temperature is 2-8 degrees centigrade.
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文献和实验的表达质粒。A)PCR 扩增的方法U6:来源于人 U6 小核启动子,常用小 RNA 表达,转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面,利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9(Cas9 表达质粒)中,一起共转。B)sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列(2000 bp)找到的序列如下:将上面复制的序列粘贴到 blast 中
and homologous recombination. These tools provide researchers with new instruments that accelerateboth forward and reverse genetics efforts. Key words Genome engineering , Cas9 , CRISPR , CRISPR-Cas9 , PAM , Guide RNA , sgRNA , DNA cleavage , Mutagenesis
继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计,Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1)CRISPR-cas9 最主要的要求:PAM 序列为 NGG。2)sgRNA,即 cas9 guide RNA,是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割,所以一般是 20 个碱基,不含 PAM 序列。3)设计的 sgRNA 一定有效吗?一般设计
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