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- 2026年03月23日
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| pUC18载体 | HP-V1601 | 300ng |
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文献和实验/2,686×660＝3.4×1011 个分子，也就是说，每3,400个pUC18分子中只有一个分子进入受体细胞。如果能够准确确定转化一微克pUC18所用的受体细胞的总数，则上述两种转化率是可以换算的。1.2.1转化率的用途利用已知的转化率和重组率参数可以帮助设计DNA重组实验的规模。例如，某一连接系统的重组率为20%，转化率为107 /mg DNA，经体外切割与连接处理后的载体DNA或重组分子的转化率比直接从细菌中制备的载体DNA低100倍，若载体DNA和重组DNA分子的转化率差异忽略不计，则欲获得
商品化的T载体有很多。本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。 【试剂与器材】
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆，很可能因为PCR产物严重过量，导致无菌落或菌落极少。 白色
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