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| BLR (DE3)感受态细胞 | HP-G0312 | 40×100 μl |
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文献和实验(3)TA克隆常见问题分析及其解决方案 附表 (4)如何检测感受态细胞的效率 ※ 为确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率。 ※ 计算公式：转化效率＝产生菌落的总数/铺板DNA的总量。 例如，取1μl（0.1 ng/μl）完整的质粒转化100μl的感受态细胞。向转化反应液中加入900μl培养液，让细菌恢复一小段时间，取100μl铺板。培养过夜，产生1000
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
Co-Expression of human DNA primase p49-p58 subunits
Adapted from W.C.Copeland,Protein Exp.& Purif 9,(1997)1-9 and Schneider,et.al.,JBC 273:34 (1998)21608-21615. Obtained from Fanning lab and revised by LSM,7/23/01 Obtained cell stock of BL21(DE3)cells cotransformed with pET21a-Hp49 (ampicillin
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