小反刍兽疫病毒（PPRV）核酸检测试剂盒

产品名称：小反刍兽疫病毒（PPRV）核酸检测试剂盒
Name   ： Porine Bordetella bronchiseptica Detection Kit
精准检测 | 快速诊断 | 助力科研
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对小反刍兽疫病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对小反刍兽疫病毒的 RNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染病料的病原学诊断。
技术参数
项目              参数详情
检测方法        荧光定量PCR/LAMP/RPA-LFD（可选）
保存条件       -20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤5次）
适用仪器        ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
样本类型        选择处于发热期（体温 40℃~41℃），排出水样眼分泌物、出现口腔溃疡、无腹泻症状的活畜采集样品。采集结膜棉拭子 2 个，鼻粘膜棉拭子 2 个，颊部粘膜棉拭子 1 个，分别放在 300μL 灭菌的 0.01mol/L pH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS)中。无菌采集血液 10mL，用常规方法分离血清。 选择刚被扑杀或者死亡时间不超过 24h 的病畜采集组织样品。无菌采集肠系膜和支气管淋巴结各 3 个~4 个， 脾、胸腺﹑肠粘膜和肺等组织各约 25g~50g，分别置于 50mL 离心管中。肉制品取 25 g~50 g，置于 50 mL 离心管中。
保存和运输     采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。

操作流程（以荧光PCR为例）
1.    样本处理：将棉拭子充分捻动，挤干后弃去拭子，取 100μL 样品液至一新的离心管中；取少量样品（2~3 g）于研钵或匀浆器中研磨，加 10 mLPBS 混匀，然后将研磨匀浆转入无菌离心管中，4℃，3000 r/min 离心 10 min 取上清液转入无菌的 1.5 mL 离心管中，编号待检；血液样品静置后取上清于 1.5mL 灭菌离心管中待检。
2.    试剂配制：加入预混反应液、酶及模板，离心混匀。
3.    扩增检测：运行预设程序（如：95℃预变性2min，95℃ 15s→60℃ 30s，45循环），分析Ct值。
结果判读
    阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
    阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。
-    严格质控标准：每批次试剂通过灵敏度、重复性、特异性验证。
-    配套服务：提供技术培训、实验方案优化及数据分析支持。
应用案例
-    科研机构研究
检测方法的局限性
1.    样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2.    样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3.    阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4.    病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5.    不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6.    试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.    本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3.反应液应避光保存；
4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
9.本产品仅供科研。
参考文献
[1]    国家质量监督检验检疫总局. GB/T 27982-2011 小反刍兽疫诊断技术[S].
[2]    辽宁省市场监督管理局. DB21/T 3253-2020  小反刍兽疫病毒实时荧光 RT-PCR 检测方法[S].
小反刍兽疫是由麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一种高度接触性传染病，主要感染绵羊、山羊，野生小反刍动物也可被感染，是危害养羊业最重要的疫病之一。OIE 曾将该病列为发病必须报告的 A 类动物传染病，我国将其列为 I 类动物疫病，一旦发现必须采取紧急严厉的措施进行控制和扑灭。 本试剂盒适用于检测的羊的肠系膜和支气管淋巴结、脾、肺、大肠等组织、眼睫膜拭子、口鼻拭子、血清   等标本中小反刍兽疫病毒 RNA，适用于小反刍兽疫病毒感染的辅助诊断。