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KAPA HyperChoice MAX 3Mb T3, 48 rxn
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上海博耀商贸有限公司
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文献和实验师从施一公,发表 6 篇Science/3篇 Cell,她被誉为「世界最具潜力女科学家」| 论文盘点
snRNA 的环 I 锚定,而内含子的 5ʹ剪接位点(5ʹSS)和分支点序列分别被 U6 和 U2snRNA 特异性识别。除了催化金属离子的配位作用外,Prp8 催化空腔中的 RNA 元件大多为催化作用做好了准备。催化潜伏阶段由包围 BPS 的 SF3B 复合物以及掩盖 5ʹ外显子- 5ʹSS 连接的剪接因子 Cwc24 和 Prp11 维持。这个结构与前面确定的结构一起勾勒出了前 mRNA 剪接反应的分子框架。 Bact 复合物的催化潜伏期(图片来源:Science) 3. Structure
在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计,实验和分析siRNA效应
对siRNA介导的降解更为敏感。候选序列在人类基因组数据库中Blast以避免和其他基因的同源性,最后每个目标靶基因选出对应4个siRNAs。 siRNA合成:分别用化学合成的方法和试剂盒(酶法)制备siRNAs并用常规方法定量。 转染:哺乳动物细胞(Hela)在不含抗生素的完全培养基中生长至 40-70%汇片,分别将每个siRNAs(分别以不同的浓度),转染试剂和Opti-MEM (Invitrogen)混合,室温下孵育15—20分钟,加入siRNAs转染混合物并适当调整培养基的体积。温育48
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
3300 bps 大小的条带。8. 连接反应16 ℃ 过夜连接。敲除效率检测如果是敲人源细胞中的基因,我们可以在 293FT 细胞检测 系统的敲除效率,小鼠的细胞中的基因可以在 MEF 和 NIH3T3 中检测系统的敲除效率将上述 Px458M /Px459M-Guide RNA1 -Guide RNA2 转染进 293FT 细胞中 36 - 48 小时通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率提取转染细胞基因组,进行基因型鉴定。引物的设计方案如图 11 所示。图 12 显示敲除 PPM1A 基因。图
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