KAPA HyperChoice 人类序列捕获探针0.5Mb

【求助】4 kb片段连接pcDNA3.1+的问题

wangch84 各位高手，兄弟最近忙于质粒构建，意图将一段长约4000 bp的片段，通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下： 1. 通过LA Taq酶扩增，并纯化回收目的片段（引物中带有酶切位点，保护性碱基＝3，上游带有Kozak序列）；由于回收效率很高，所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段，H2O 20 μl，10 X K BUFFER 4 μl，两种酶各2 μl，37℃作用过夜（12-14 h

师从施一公，发表 6 篇Science/3篇 Cell，她被誉为「世界最具潜力女科学家」| 论文盘点

体去除。与主剪接体相比，次要剪接体的组成、组装、功能状态、活化、调控和结构一直是个谜。 在这项研究中，白蕊及其同事在 U12 型内含子（仅占人类基因组 1%）剪接实验中组装了活化的人源次要剪接体，并首次报道了人源次要剪接体高分辨率（2.9 Å）的三维结构，解析了在剪接反应中的关键构象——激活态次要剪接体（次要 Bact 复合物）的结构及对稀有内含子（U12 依赖型内含子）的识别剪接机理。 主要 Bact 复合物的 13 种蛋白质，包括 5 种 NTC 和 NTR 组分，在次要 Bact 复合

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（上）

方法 早在1942年,C.H.Waddington首次提出表观遗传学(epigenetics)的概念,并指出表观遗传与遗传是相对的,它主要研究基因型和表型的关系。几十年后,霍利迪(R. Holiday)针对表观遗传学提出了更新的系统性论断，也就是人们现在比较统一的认识[1]，即在不改变基因组序列的前提下，通过DNA和组蛋白的修饰来调控基因表达，这种修饰以DNA甲基化最为常见。 继人类基因组计划结束后，2003年人类表观基因组协会(Human Epigenome Consortium, HEC)宣布