pEcoli-6xHN-GFPuv质粒

大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入

类似物：4-、5- 和  6- 氟色氨酸（ fW )，Sigma ( St. Louis，MO)。 ( 4 ) 质粒：用于蛋白质高表达。用于基因的聚合酶链反应（PCR ) 扩增或另外来源的编码 GFPuv 基因和质粒来源的 Kn 激酶基因。 ( 5 ) Vent 和 Tag DNA 聚合酶，限制性内切核酸酶，DNA 酶，T4 激酶和 T4 DNA 连接酶。 ( 6 ) 寡核苷酸引物和 dNTP. （Invitrogen)。 ( 7 ) 细菌蛋白抽提物试剂（B-PER ) 和 B-PER II 

原核蛋白表达载体的讨论

pET 系统是在大肠杆菌中克隆和表达重组蛋白的最强大系统。根据最初由 Studier 等开发的 T7 启动子驱动系统， Novagen 的 pET 系统已用于表达成千上万种不同蛋白。 控制基础表达水平 pET 系统提供 6 种载体 - 宿主菌组合，能够调节基础表达水平以优化目标基因的表达。没有单一策略或条件适用于所有目标蛋白，所以进行优化选择是必要的。 宿主菌株 质粒在非表达宿主菌中构建完成后，通常转化到一个带有 T7 RNA 聚合酶基因的宿主

昆虫杆状病毒表达系统的研究进展

通过转移载体的介导．即将极晚期基因(如多角体基因及其边界区)克隆入细菌的质粒中，消除其编码区和不合适的酶切位点，保留其5’端对高效表达必需的调控区，并在其下游引入合适的酶切位点供外源基因的插入，即得到转移载体。将要表达的外源基因插入其启动子下游，再与野生型AcNPV DNA共转染昆虫细胞，通过两侧同源边界区在体内发生同源重组，使多角体蛋白基因被外源基因取代。而将外源基因整合到病毒基因组的相应位置，由于多角体基因被破坏，则不能形成多角体。这种表型在进行常规空斑测定时，可同野生型具有多角体的病毒空斑区别