YIplac211质粒

碱裂解法大量提取质粒（500mL菌液）

相关专题 成功走出第一步：DNA提取 碱裂解法 大量提取质粒(500mL菌液) 1、取培养至对数生长后期(一般培养12～16小时)的含待提质粒的细菌 培养液于离心杯中，配平，4℃下4000rpm离心15min，弃上清，然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽。 2、向盛有细菌 沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶液Ⅰ，重悬沉淀(先加5mL溶液Ⅰ，用干净的玻璃棒搅拌均匀后，再加剩下的部分)。

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

发表[1，2，3]。国内针对外源基因在原核细胞中高效表达的关键因素，构建了高效表达载体[4]，并在此基础上成功表达了一系列细胞因子的基因[5，6，7]。我们在分析了国内外有关在原核系统中表达蛋白的实验资料的基础上，对在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略所涉及的内容进行全面的总结，以期有助于我国在这方面的研究。 1.有效表达载体的构型 构建表达质粒需要多种元件，需要仔细考虑它们的组合，以保证最高水平的蛋白质合成。E.coli 表达载体的基本结构[8]。 启动子(以杂和的tac 启动子为例

基因插入位点和模式

减弱，而相应的大分子质量的条带信号增强（ 图 13.6)。这一结果表明，在 Southern 分析中出现的较为复杂的高分子质量的杂交条带，也可能是因为限制性内切核酸酶酶量不足导致的一种假象。因此，在鉴定这些杂交条带时需格外小心谨慎，尤其是把这些杂交条带的信号强度作为鉴别标准时，要考虑是否有人为因素影响。 注 12 : 应该进行多次，如三次以上，测定用于作为标样的植物基因组和质粒 DNA 的浓度。由于 DNA 浓度测定的偏差，有可能会影响后续转基因拷贝数的测定结果的准确性。要引起