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作为新一代的表面等离子共振(SPR)系统,Biacore™ 8K 全新的 8 根进样针设计,能够平行检测 8 种不同样品,并快速获得动力学和亲和力数据,相较于传统的单根针系统,检测速度提高高达 8 倍。即使是复合体靶点或新型药物如双特异抗体,Biacore™ 8K 多通道的检测通量,便捷灵活的方法设计,也能够极大地提高药物筛选与精确表征的效率,大幅度地降低检测时间。
关键性能和优点
●从筛选到表征,一体化解决方案;
●一天内至少可筛选 2300 个样品;
●5 小时可完成 64 对动力学表征;
●60 小时无人值守,操作程序队列运行,便捷的数据拟合分析;
●即使是小分子或复合体靶点如:GPCR 的检测,同样能够得到高质量数据;
●超高亲和力分子的解离速率精确表征。
Biacore™ 8K 的超高灵敏度为低丰度、高敏感的蛋白复合体靶点如:GPCRs 的检测提供了便利。GPCRs 通常在整个分析过程中只有一小部分保持生物活性。Biacore 8K 能够直接对细胞膜等粗样品进行捕获和检测而不需要对样品进行纯化,从而有效的避免不必要的处理对样品生物活性的影响。
高灵敏度也使分析超低分子量有机化合物甚至是低亲和力检测(KD 在毫摩尔级)成为可能,这对小分子片段筛选非常关键。
Biacore™ 8K 同样为双价分析物如抗体或二聚体蛋白的分析提供极大的灵活性。通过降低偶联量能够极大程度的降低二价分子的“舞蹈效应”,从而得到更高可信度的数据。低偶联同样能够降低高密度配体分子间的聚集效应,从而有效减少二次结合,增加活性结合分子的比例。超低的偶联量不仅能够提供更准确的数据而且使得分析更简便、快速、节省时间。
Biacore™ 8K 能精确的检测与判别快结合的样品,这在药物疗效的生物学研究中至关重要。
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文献和实验复合模式层析原理 复合模式层析是一种集合多种类型的相互作用(如离子交换、疏水、氢键、嗜硫亲和等)于一种层析介质从而同时具备高选择性和高分辨率的层析技术。 图15 复合模式层析配基类型 特点 相较于传统层析模式具备更快的传质速率和更高的分辨率。 在高回收率条件下实现有效分离。 能够同时去除多种杂质,如多聚体、宿主蛋白、病毒、电荷异构体等。 适用于难以同时去除多种痕量杂质的层析需求。 层析介质 目前Cytiva共有四款复合模式层析介质: Capto™ Adhere系列可有
的分辨率的前提下,缩短运行时间,节省样品和缓冲液。 ● 脱盐与缓冲液置换:与上述的精细分离不同,脱盐或缓冲液置换属于组分分离,即将大分子样品与小分子或离子进行分离的过程,因此对于分辨率的要求相对不高。上样体积可达柱体积的 30%。 绝招三:使用凝胶过滤进行样品的精细分离时,应该这样选择层析柱 (1)根据目标蛋白的大小选择适合的分离范围。 (2)根据上样量,选择合适的柱体积的柱子类型。上样体积一般在柱体积的 0.5%~4%。 (3)根据具体需求确认柱子具体型号,一般选择高分辨率的柱子
crystal micro-balance,QCM),以及表面等离子体共振等。其中SPR技术对界面变化的灵敏度远高于其他检测方法且无须荧光染色标记,已成为最具发展潜力的一项技术之一。自从B.Liedberg在1983年将SPR原理应用于气体成分检测后,以SPR为基础的分析仪,已经成功且广泛的应用于各研究领域。 表面等离子共振技术是一项用于分析生物大分子之间的相互作用的技术,它可以定性的判断两分子之间是否有相互作用,比较一种分子与其他几种分子之间相互作用的强弱,也可以实时定量的测定分子间相互作用的亲和力参数
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