- ￥260
- 烜雅生物
- XY-PCR416C
- 国产
- 2025年12月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
199
- 英文名：
Cryptosporidium Tyzzer Detection Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
商品名称：隐孢子虫（CT）核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）
Name ：Cryptosporidium Tyzzer Detection Kit（Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒
【预期用途】 本试剂盒适用于检测人、动物的粪便等样本中的隐孢子虫，用于隐孢子虫感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对隐孢子虫的特异性引物，结合一条特异性探针， 用荧光 PCR 技术对隐孢子虫的 DNA 进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。
【试剂组成】
| 包装规格 | 50T/盒 |
| CT 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| CT 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 固体粪便取 1g，水样便取 0.5~1mL。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 固体粪便用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；液体粪便直接取 100μL 至 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取 推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按 照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | CT 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 19μL | 1μL |
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM、VIC，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
| 2 | 45 cycle | 95℃ | 15sec | 否 |
| 60℃ | 30sec | 是 |
5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。
5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
6. 检测方法的局限性
1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验- 120%，且标准曲线 R2≥ 0.99，引物的扩增效率才是合格的，定量出来的 CT值才可以用来计算。且扩增效率越接近 100%，引物的扩增性能越优。 1、若扩增效率不满足 90 - 120%，那 CT值偏大是因为扩增效率不达标导致的，需要重新设计引物。 2、若引物的扩增效率满足 90 - 120% 前提下，CT 值仍然很大，则是基因本身表达量低造成的 CT 值偏大，可以提高模板的添加量，但最根本的方法是改为探针法进行定量。探针法的灵敏度是高于染料法的。
实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
。 【产品研发意义】 埃博拉出血热(EHF)是由埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)引起的一种急性出血性传染病，发病率快，致死率高，是人类危害最严重的传染病之一，对公共卫生安全和人类的健康有很大的威胁。 到目前为止，EHF还没有有效治疗的药物和疫苗。我国尚未有检测到EBOV病毒，为了防止EBOV进入我国，建立一种快速、准确、敏感的检测方法显得尤为重要。为此，我公司研制出埃博拉病毒Z亚型核酸荧光PCR检测试剂盒、埃博拉病毒Z、S亚型双重核酸荧光PCR检测试剂盒和埃博拉病毒Z、S、B、C、R
