qPCR系列 miRNA荧光定量PCR试剂盒

qPCR系列  miRNA荧光定量PCR试剂盒 HRbio? miRNA qPCR Kit miRNA荧光定量PCR试剂盒

产品信息

产品名称	产品编号	规格
HRbio? miRNA qPCR Kit miRNA荧光定量PCR试剂盒	HRF0711	50T

 

 

产品描述

       HRbio? miRNA qPCR Kit采用 SYBR Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA的荧光定量检测。本产品包含miRNA qPCR所需要的所有试剂，组分分别是：2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。其中2×miRNA qPCR Mix（含SYBR Green）是专门为miRNA荧光定量检测而特别研发的新一代预混液形式的qPCR试剂。其中DNA polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式，配合特殊的buffer体系，使得反应特异性更好，灵敏度更高，并且在更广的范围内进行准确定量。

 

产品组分

 

编号	组分	HRF0711（125次×20 μl）
HRF071-A	2×miRNA qPCR Mix(with SYBR Green I)	1.25 mL
HRF071-B	Reverse primer（10μM）	55 μL

 

 

运输与保存方法

1.-20°C 避光保存至少 12 个月，使用前充分融解混匀。

2.2 ×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在 4°C，避免反复冻融。

3.Reverse primer(10μM )每次用完置-20°C 保存。

 

注意事项

1.miRNA 链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。

2.对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（5-10倍或者100倍）。

3.本品中含有荧光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

4.2 x miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.本产品仅作科研用途！

 

操作步骤

1. 在室温融化2 ×miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。

2. 使用时请将2 ×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。注：请不要使用振荡器混匀。

3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制：

 

组分	体积（μL）	体积（μL）	终浓度
2×miRNA qPCR Mix	25	10	1×
Forward Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
miRNA链cDNA模板	X	X	-
无菌超纯水	To 50	To 20	-

 

【注】： 使用前务必充分混匀， 避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1- 1.0 μM之间进行调整。

b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

c) 模板稀释：cDNA原液建议5- 10倍稀释，*佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。

d) 反应体系：使用20μL或50 μL ，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

qPCR系列  miRNA荧光定量PCR试剂盒 PCR 循环（三步法）

 

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2-3 min	1
变性	94℃	10-20sec	35-45
退火	60°C	10-20 sec
延伸	72℃	20 sec
熔解曲线阶段	仪器默认设置          1

 

 

PCR 循环（二步法）

 

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2-3 min	1
变性	94℃	10 sec	35-45
退火/延伸	60℃	30-34sec
熔解曲线阶段	仪器默认设置          1

 

【注】高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。

a)  预变性时间： 根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至 2 min。

b)  退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。

c)  荧光信号采集（★）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

30sec 以上： Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96

31sec 以上：Applied Biosystems: 7300

 

34sec 以上： Applied Biosystems: 7500

d)  熔解曲线： 通常情况下可以使用仪器默认程序。

货号	品名	规格
HRF0011	Taq DNA Polymerase  DNA聚合酶	1000U
HRF0012	Taq DNA Polymerase  DNA聚合酶	5×1000U
HRF0021	2×HRbio? Taq PCR Master Mix (Red)	1mL
HRF0022	2×HRbio? Taq PCR Master Mix (Red)	5×1mL
HRF0023	2×HRbio? Taq PCR Master Mix (Red)	50×1mL
HRF0024	2×HRbio? Taq PCR Master Mix (Red)	100×1mL
HRF0025	2×HRbio? Taq PCR Master Mix for PAGE	1mL
HRF0026	2×HRbio? Taq PCR Master Mix for PAGE	5×1mL
HRF0027	2×HRbio PCR Master Mix(No Dye)	1mL
HRF0028	2×HRbio PCR Master Mix(No Dye)	5×1 mL
HRF0028L	2×HRbio PCR Master Mix(No Dye)	100×1 mL
HRF0029	2×HRbio? PCR Master Mix (Green)	1mL
HRF0030	2×HRbio? PCR Master Mix (Green)	5×1 mL
HRF0030L	2×HRbio? PCR Master Mix (Green)	100×1 mL
HRF0031	HRbio? qPCR SYBR? Green Master Mix (No  Rox)	1mL
HRF0032	HRbio? qPCR SYBR? Green Master Mix (No  Rox)	5×1mL
HRF0033	HRbio? qPCR SYBR? Green Master Mix (No  Rox)	50×1mL
HRF0041	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)	1mL
HRF0042	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)	5×1mL
HRF0043	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox  Plus)	50×1mL
HRF0051	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)	1mL
HRF0052	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)	5×1mL
HRF0053	HRbio? qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox  Plus)	50×1mL
HRF0061	HRbio?   Universal qPCR SYBR Green Master Mix	1mL
HRF0062	HRbio?   Universal qPCR SYBR Green Master Mix	5×1mL
HRF0063	HRbio?   Universal qPCR SYBR Green Master Mix	50×1mL
HRF0071	HRbio? Probe qPCR Mix hUDG热启动探针法定量PCR Mix（含抗体修饰热启动酶  +hUDG）	500T
HRF0081	HRbio? Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶	10U
HRF0082	HRbio? Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶	100U
HRF0083	HRbio? Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶	500U
HRF0084	HRbio? Hi-Fi High Fidelity DNA  Polymerase高保真DNA聚合酶	1000U
HRF0085	Profusion? DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶	100U
HRF0086	Profusion? DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶	500U
HRF0087	Profusion? DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶	1000U
HRF0088	2×Profusion? PCR Master Mix 超高保真酶预混液	1mL
HRF0089	2×Profusion? PCR Master Mix 超高保真酶预混液	5×1mL