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2-Chloro-1-trityl-1H-imidazole
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文献和实验Small scale His-Tag fusion protein purification under denaturative conditions
buffer: 6 to8M Urea , 20mM Tris pH 7.5, 100mM NaCl, and appropriate imidazole concentrations. Limitations Do not exposed Ni matrices to reducing agents as DTT or DTE ( you can use ßME up to 20mM); chelating agents as EDTA and EGTA; NH
Who can help me-Molecular Biology
and incubate 55� ON. - phenol/chloro extraction 1h @ 4℃ under soft rotation. - chloro/isoamyl alcool (24:1) - 1 Vol Isopropanol precipitation. Maybe I use a higher conc of proteinase K than you...I don't know, but I think it is a protein contamination
，1ml NI-NTA/柱)，待完全沉淀(约1h)，先用10ml灭菌水洗，流速：重力作用 2.6 10ml 1*Bind Buffer 进行平衡，流速：重力作用 2.7 将准备好的样品上样，pET.wap.ns; PET21 only分别上柱(结合时间1h-1.5h流速控制在0.1ml/min左右， EP 管，分管收集上样后液体) 2.8 10ml 1* Bind Buffer 洗柱子(收集洗脱液10管，流速在0.3-0.4ml/min左右)
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