总超氧化物歧化酶(SOD)(检测服务)*MAIGE实验*MT

有氧化物质存在下核黄素被光还原，在有氧条件下，被还原的核黄素极易再氧化产生超氧阴离子自由基(O2-)，O2-可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有强吸收，而SOD可清除超氧阴离子(O2-)，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明SOD活性愈低，反之酶活性愈高，据此通过酶标仪比色分析就可以计算出样品中总超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用SOD抑制NBT在光照下的还原作用来确定酶活性大小，可用于检测植物、组织、细胞、血清或其它样品中SOD活性。

实验结果展示：

(1)  样本接收：血清、血浆、透明液体状样本、组织匀浆、植物等

(2)实验步骤：

1.准备SOD标准品：将SOD标准品稀释至如下系列浓度：200、100、50、20、10、5、2U/ml，各取20μl参考样品进行检测。

2.选取合适的光源：在光照培养箱或日光灯下，用光度仪测定光度值为3500~4000Lx的适合光照反应的位置，做出标记。

3.配制NBT工作液：将Met缓冲液与NBT溶液按23:3的比例混合。

4.SOD加样：用96孔板设置空白对照孔、光照对照孔、测定孔，在低光强条件下加入待测样品和其它各种溶液，加入FD溶液后充分混匀。

5.SOD测定:混匀，取空白对照孔置于暗处，其他各孔置于4000Lx日光下反应20min；反应结束后，以不照光的空白对照孔调零，用酶标仪测定560nm处吸光度。