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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
详见説明
- 英文名:
Fibrillin 2
- 库存:
10
- 供应商:
上海晶风
- 规格:
50T/100T
产品名称:Fibrillin2原纤维蛋白2免疫组化试剂盒
保存条件:不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃(避免反复冻融),其他均保存 2-8 ℃
试剂盒特点:该试剂盒具有灵敏度高,特异性强、背景清晰、成本低廉等特点,是理想的免疫组化染色试剂盒。适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片,可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。
温馨提示:本检测试剂盒适用于人、大小鼠,兔等绝大多数组织,但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等),应选用非生物素检测系统,或用avdin 封闭。
Fibrillin2原纤维蛋白2免疫组化试剂盒所含试剂:
1、对应一抗,(应用:IHC-P及IHC-F=1:400-800 )
2、内源性过氧化物酶阻断剂
3、封闭用正常山羊血清工作液
4、二抗工作液生物素标记羊抗兔IgG
5、辣根酶标记链酶卵白素工作液
6、DAB显色液 B液
7、DAB 显色液 A液
8、抗体稀释液

Fibrillin2原纤维蛋白2免疫组化试剂盒实验操作步骤(以石蜡切片为例)
仪器、设备:
移液枪、免疫组化笔、水浴锅、计时器、孵育湿盒、切片架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。
操作步骤
1. 脱蜡水化。将石蜡切片置于新鲜二甲苯脱中浸泡 15 分钟,重复三次。去除多余的液体后,依次置于无
水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分钟,蒸馏水(或自来水)冲洗 5 分钟。
用 PBS 缓冲液(试剂 1,将干粉溶解于 2L 去离子水中)冲洗切片 5 分钟,重复三次。
2. 抗原修复。将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯(或修复盒)中的耐高温塑料切片架上,加适量修复液 1×
柠檬酸钠抗原修复液(试剂 2,将 100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成 1×柠檬酸钠抗原修复液),
液面要浸过切片组织一定高度,将修复盒置于沸水中煮沸修复 15 分钟后取出玻片,自然凉至室温。用 PBS
缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
注意:抗原修复时,修复液务必保证切片始终浸泡在液体内,一般情况:修复液的量约为 800mL/1 架。
3.阻断内源性过氧化物酶。用吸水纸擦干玻片,免疫组化笔在组织周围画圈,滴加 50μL 内源性过氧化物酶
阻断剂(试剂 3)到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育 30 分钟,用 PBS 缓冲液冲洗切片 5
分钟,重复三次。
4.血清封闭。用吸水纸擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(试剂 5),37℃封闭 20 分钟,以减少非
特异性染色。
5. 一抗孵育。用抗体稀释液(试剂 4)将一抗原液稀释成工作液,用吸水纸擦干玻片组织周围的液体,滴
加适量抗体工作液,置于湿盒 4℃孵育过夜或 37℃孵育 1h-2h。
6. 复温。4℃过夜后从冰箱拿出样本,在室温下孵育 15min 复温(抗体孵育为 4℃过夜选用此步骤,如室
温孵育直接进入下一步清洗)。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
7. 二抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 生物素标记的羊抗兔 IgG(试剂 6),37℃孵育 20 分钟,用 PBS
缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
8. 三抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育(试剂 7),37℃孵育 20 分钟,
用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。
9. 显色。甩去 PBS 缓冲液,吸水纸擦干切片; 每张切片滴加新鲜配制的 DAB 工作液 50μL(试剂 8:试
剂 9:试剂 1=1:1:18 比例配置),孵育 3-5min,光学显微镜下观察染色结果,切勿显色过深;显色后用自
来水冲洗切片终止显色。
10. 复染。滴加适量苏木素染液(试剂 10)复染,孵育 1-5 分钟,自来水冲洗 5 分钟,滴加盐酸酒精分化
液分化 30 秒,自来水冲洗。
11. 脱水封片。将玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇,各浸泡 5 分钟,
再将玻片放入二甲苯中浸泡 15 分钟,重复三次。玻片取出来稍晾干,用中性树胶封片。
结果判断
在光学显微镜下对染色的切片观察并判断。苏木素染细胞核为蓝色,DAB 显色的阳性表达为棕黄色。
Fibrillin2原纤维蛋白2免疫组化试剂盒注意事项
1. 检测样本时需同时做阴性对照和阳性对照,否则结果不可取。
2. 本品中的配套试剂,请不要用其他生产商产品替换使用。
3. DAB 为致癌物质,请采取必要的防范措施,现用现配。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。
欢迎新老客户垂询定订Fibrillin2原纤维蛋白2免疫组化试剂盒
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