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100
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/
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6个月
- 供应商:
信帆生物
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常温保存
产品名称:醋酸纤维素薄膜电泳缓冲液
产品规格:500ml
储存条件:室温密封
有效期:6个月
应用:
醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋 白,甲胎蛋白,类固醇激素及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。

实验原理
醋酸纤维薄膜电泳是一种用电泳方法分离血清蛋白质的技术。血清蛋白质的等电点一般小于7.5,在pH8.6的缓冲液中带负电,因此会向正极移动。由于各种蛋白质的P不同,所带电荷和分子大小不同,在同一电场中的泳动速度也不同。分子小而带电多的蛋白质移动较快,反之则慢。电泳一段时间后,蛋白质成分可以相互分离。分离后的蛋白质需经显色才能检测,通常用氨基黑10显色。各带的颜色深浅与蛋白质含量几乎成正比,因此可以根据光密度求得各蛋白质成分的相对含量。
实验步骤(仅供参考)
泡膜:洗净手,戴乳胶手套取薄膜,在毛面距端15cm处用铅笔轻划一直线,小心将膜浮在醋酸纤维素薄膜电泳缓冲液上,然后浸湿后将膜完全浸入缓冲液中,浸泡约1小时。
仪器准备:检查电源,接好电线(不接地线),调整水平。
点样:取出泡好的薄膜,用纸吸去多余的缓冲液,毛面向上,在毛面划线处点样,注意点样量适当。待样品渗入膜内后,将点样面翻转朝下以防电泳时薄膜表面干燥。
电泳:盖上电泳槽盖,平复5分钟。然后检查电源正负极无误后通电,电压15V/cm,或电流0.4~0.6mA/cm(膜宽度),电泳约6分钟。
断电:电泳结束后断电。
显色:断电后将薄膜取出,浸入氨基黑10中5分钟。
浸洗:依次在三个洗皿中漂洗,每次5分钟,至背景无色,正带清晰,然后晾干。
醋酸纤维素薄膜电泳缓冲液
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文献和实验醋酸纤维素薄膜电泳缓冲液
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时
TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉淀后则予以废弃。 以往都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮存液)进行琼脂糖凝胶电泳。 但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
a.TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉淀后则予以废弃。以往都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。 b.碱性电泳缓冲液应现用现配。 c.Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
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