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文献和实验凝胶过滤层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开,由于它们在分配系数上有显著差异,这种分离又称组别分离,一般可选用Sephadex G-25和G-50,对于小肽和低分子量的物质(1000-5000)的脱盐可使
。 方法二:用脱盐柱进行缓冲液交换 PD-10交换柱是为蛋白质溶液进行缓冲液交换而设计的,其中的微珠孔径(6000MW)比绝大部分蛋白质要小,但比缓冲液中其他分子要大。当蛋白质溶液流经该柱时,蛋白质分子很快通过,而其他分子被截留在柱子的微珠中。因此,流出的蛋白质是溶解在平衡柱子的缓冲液中,从而实现了蛋白质的缓冲液交换。 【试剂及材料】 1、 材料: PD-10 脱盐柱(Amersham Pharmacia,PD-10) 2、 试剂:生物
质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,可以用凝胶层析法除去,这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速、蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。适用的凝胶为SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6。柱长与直径之比为5-15,样品体积可达柱床体积的25%-30%,为了防止蛋白质脱盐后溶解度降低会形成沉淀吸附于柱上,一般用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液使层析柱平衡,然后加入样品,再用同样缓冲液洗脱,收集的洗脱液用冷冻干燥法除去挥发性盐类。 ⑵ 用于分离提纯:凝胶层析法已广泛
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