甲氧苄氨嘧啶，738-70-5，Moligand™, ≥99

ELISPOT标准操作程序（protocol）

第一天：ELISPOT包被程序，提供两种方案供选择（严格注意无菌操作）一、传统酒精预湿包被程序该方案中，需经过：70%乙醇预湿PVDF膜、无菌去离子水洗涤去除乙醇、拍干，最后，加入已稀释好的包被抗体到各实验孔完成包被操作。具体操作如下：1、实验卡片填写：设计好试验，把每个孔要加入的内容做成卡片，到时候就会从容很多。2、每孔加入15μL 70%的乙醇预湿。注意：（1）未润湿PVDF膜是洁白、不透明的，经乙醇润湿后，颜色变暗，呈半透明状，很容易观察二者的区别。（2）加乙醇时，枪头应该靠在孔壁接近孔

RNA-biotin based pulldown assays for the detection of siRNA targeted genomic regions and siRNA directed histone modifications (PROT32)

with the better the chances of a successful pulldown. A total of 4.0×106 293 HEK cells (~70% confluent) are plated and 24 hours later transfected with 15µg of a RNA Polymerase II expressing flag-tagged construct plasmid. We generally use Lipofectamine 2000™

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

- 120%，且标准曲线 R2≥ 0.99，引物的扩增效率才是合格的，定量出来的 CT值才可以用来计算。且扩增效率越接近 100%，引物的扩增性能越优。 1、若扩增效率不满足 90 - 120%，那 CT值偏大是因为扩增效率不达标导致的，需要重新设计引物。 2、若引物的扩增效率满足 90 - 120% 前提下，CT 值仍然很大，则是基因本身表达量低造成的 CT 值偏大，可以提高模板的添加量，但最根本的方法是改为探针法进行定量。探针法的灵敏度是高于染料法的。