5-溴-1，3-二乙基-2-碘苯，942475-12-9，≥

原位杂交组织化学实验技术

剂。 　　（二）玻片和组织切片的处理 　　1．玻片的处理玻片包括盖片和载片应用热肥皂刷洗，自来水清洗干净后，置于清洁液中浸泡24h，清水洗净烘干，95%酒精中浸泡24h后蒸馏水冲洗、烘干，烘箱温度最好在150℃或以上过夜以去除任何RNA酶。盖玻片在有条件时最好用硅化处理，锡箔纸包裹无尘存放（硅化方法见附录）。 　　由于ISHH的实验周期长，实验程序繁杂，因此，要应用粘附剂预先涂抹在玻片上，干燥后待切片时应用，以保证在整个实验过程中切片不致脱落。常用的粘附剂有铬矾-明胶液，其优点是价廉易得

分子生物学常用实验技术（page 2)

来起始DNA 的合成。cDNA 合成最常用的引物是与真核细胞mRNA 分子3'端poly(A)结合的12-18 核苷酸长的oligo(dT)。 三、cDNA 第二链的合成 　　cDNA 第二链的合成方法有以下几种: (1) 自身引导法合成的单链cDNA 3'端能够形成一短的发夹结构,这就为第二链的合成提供了现成的引物,当第一链合成反应产物的DNA:RNA 杂交链变性后利用大肠杆菌DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段或反转录酶合成cDNA 第二链,最后用对单链特异性的S1 核酸

推荐 分子生物基本技术

。 　　2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉,高压灭菌。 　　3、 氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液, -20℃保存备用。 　　4、 溶菌酶溶液： 用10mmol/L Tris·Cl(pH8.0)溶液配制成10mg/ml,并分装成小份(如1.5ml)保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃。 　　5、 3mol/l NaAc (pH5.2)： 50ml水中溶解40.81g NaAc·3H2 O,用冰醋酸调pH至5.2, 加水定容