- ￥2664.90 - 3507.90
- 阿拉丁
- 上海
- P746056
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C储存
- 英文名：
Positive Control Plasmid Pair for Flag&Myc Co-IP
- 库存：
期货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
P746056-2×1μg/P746056-2×100μg
| 规格： | P746056-2×1μg | 产品价格： | ￥2664.9 |
|---|---|---|---|
| 规格： | P746056-2×100μg | 产品价格： | ￥3507.9 |
产品介绍：
阿拉丁自行研发生产的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair for Flag&Myc Co-IP)包含pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA两种质粒，可以用于在哺乳动物细胞中表达N端带有3X Flag标签的人源p53和Myc标签的LTA (large T antigen)融合蛋白。因为p53和LTA蛋白间具有较强的相互作用，本质粒对可作为共转染细胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的阳性对照使用，也可以单独转染细胞作为免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的阳性对照使用。免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术，通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠)，或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠)，然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物，从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来，随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等1-2]。pCMV-3X Flag-p53质粒表达p53。p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53)，全长393氨基酸，理论分子量为43.7kDa，实际分子量约为53kDa，是调控细胞周期的重要转录因子，主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等，野生型的p53是一个重要的抑癌基因3]。pCMV-Myc-LTA质粒表达LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen)，也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1)，全长708氨基酸，分子量为81.6kDa，是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化，可以诱导实验动物肿瘤的形成，为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型4]。本质粒对均含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。本质粒对用于磁珠法免疫共沉淀的效果参考图1A，用于琼脂糖凝胶法免疫共沉淀的效果参考图1B。图1. 阿拉丁的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对用于免疫共沉淀的效果图。图A使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) 和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) ，图B使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) 和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) 。293T细胞(人胚肾细胞)单独或共转染pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA质粒36小时后，使用Western及IP细胞裂解液裂解，并使用相应的标签蛋白免疫沉淀试剂盒进行免疫沉淀。泳道1为小鼠IgG磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品，为免疫共沉淀的阴性对照；泳道2、3和4为磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品，其中图A是经3X Flag Peptide或c-Myc Peptide洗脱后的样品，图B是经SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脱后的样品，从泳道4可观察到共转染的Flag-p53与Myc-LTA可以相互作用。Input即全细胞裂解液(Total cell lysate)。Western印迹成像由Imager 600化学发光成像系统完成。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。推荐使用的测序引物序列如下：CMV-F primer: 5' -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'BGH-R primer: 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'pCMV-3X Flag-p53和pCMV-Myc-LTA的全序列信息:D3041-1 pCMV-3X Flag-p53-全长序列.txt；D3041-2 pCMV-Myc-LTA-全序列.txt。注意事项：
本质粒未经阿拉丁书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。本质粒对仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证，未经过功能性验证。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：
1.首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。 2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl，共400µl。可以直接用于转染细胞。 参考文献： 1.Lee C. Methods Mol Biol. 2007. 362:401-406. 2.Gevaert K, Vandekerckhove J. Electrophoresis. 2000. 21:1145-1154. 3.Levine AJ. Cell. 1997. 88(3):323-331. 4.Xiao CY, Jans P, Jans DA. FEBS Lett. 1998. 440(3):297-301.风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验tag实际上从成本角度和His tag差不多，洗脱试剂价格低廉，因此可用于大规模PD之后的质谱分析，能获取最全面的相互作用的信息。然后由于其中包含钙调蛋白相互作用domain，天然会结合钙信号相关蛋白，从而干扰或掩盖靶蛋白与钙信号蛋白之间的相互作用，有一定的应用局限。当然，笔者不太清楚近年来该方法有无改进，但正是由于引入钙调domain才实现了降低成本的目的，因此猜测可能性不大。 3. Myc、HA、Flag-tagged： Myc仍然会有天然的干扰，应用略有局限；相较后两者是人工合成专门用于
浅析染色质免疫沉淀（ChIP）技术在 DNA 与蛋白质相互作用研究中的重要性
, B.E., et al., A bivalent chromatin structure marks key developmental genes in embryonic stem cells. Cell, 2006. 125(2): p. 315-26. [19] Topp, C.N., C.X. Zhong, and R.K. Dawe, Centromere-encoded RNAs are integral components of the maize kinetochore
或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
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